骨髓干细胞三系分化图（骨髓干细胞的分化）

本文目录一览：

• 1、骨髓间充质干细胞三系诱导分化技术
• 2、造血干细胞的吹头发时掉发严重分化示意
• 3、骨髓造血干细胞的分化
• 4、骨髓造血干细胞,神经组织干细胞,胚胎干细胞的分化程度
• 5、t细胞和b细胞都是由骨髓造血干细胞分化发育而来
• 6、骨髓中的前体细胞是什么

骨髓间充质干细胞三系诱导分化技术

1.1 接种干细胞

取对数生长期的细胞，按照2.0x 10e4cells/cm2的细胞密度接种至培养器皿，于37°C,5%CO2培养环境下培养至汇合度90~100%，弃掉上清，加入成脂诱导分化培养基诱导液。NOTE:如细胞贴壁性较差，建议使用0.1%明胶对培养底面进行包被。

1.2 细胞分化诱导

于37°C, 5%CO2培养环境下培养约3天，更换为成脂诱导分化培养基维持液，培养1天后，再更换为成脂诱导分化培养基诱导液，继续培养3天。按照以上换液频率诱导14~21天,并注意观察细胞形态变化。根据细胞诱导形成的脂滴数量和大小，决定终止细胞诱导的时间，并进行染色鉴定。

2. 染色鉴定

2.1 细胞固定

吸去培养基使用适量1xPBS清洗一次,弃去后取适量4%中性甲醛溶液覆盖培养器皿底面,室温固定30~60min,弃去固定液再使用1xPBS清洗两次。

2.2 油红0染色

取生理盐水或1xPBS与油红O原液配制油红0工作液(油红0原液:生理盐水=3:2)，现用现配。配制后可对油红0工作液进行离心，以沉淀染色液中的过饱和析出物。向清洗干净的诱导孔内加入适量油红0工作液,静置染色30min。吸走油红0工作液，用1xPBS清洗两次，并加入适量1xPBS避免细胞干燥。

2.3 诱导评估

显微镜下观察成脂染色效果，并进行图像采集和诱导评估。诱导成功时，脂滴与油红0染料结合后呈现红色或橘红色。NOTE:干细胞的成脂分化水平因细胞类型、细胞供体来源，培养条件、细胞代次、细胞状态和分化时间等因素而异。

1. 细胞分化诱导

将对数生长期的细胞消化下来计数，成软骨诱导分化培养基诱导液重悬细胞，离心后调整细胞密度密度1.0~2.0x 10e7cells/mL。吸取20 μl细胞悬液(约2.0~4.0x 10e5个细胞)悬滴至24孔板中央。置于37°C， 5%CO2培养环境下培养2~3 h使细胞贴壁。2~3 h后补充1 mL成软骨诱导分化培养基诱导液正常培养。每隔2~3天换液一次。按照以上换液频率诱导21~28天，并注意观察细胞形态变化。

2. 染色鉴定

2.1 细胞固定

吸去培养基使用适量1xPBS清洗一次,弃去.后取适量4%中性甲醛溶液覆盖培养器皿底面，室温固定30~60min后，弃去固定液再使用1xPBS清洗两次。

2.2 阿利辛蓝染色

向清洗干净的诱导孔内加入适量染色液，避光静置染色30min。吸去阿利辛蓝染色液，用1xPBS清洗两次,并加入适量1xPBS避免细胞干燥。

2.3 诱导评估

显微镜下观察成软骨染色效果，并进行图像采集和诱导评估。诱导成功时，软骨组织中的内酸性粘多糖可被阿利辛蓝染成蓝绿色。

1. 干细胞的准备

将对数生长期的细胞消化下来计数，取3x 10e5个细胞转移到15mL离心管中，250g离心4 min。弃上清,加入0.5 mL成软骨诱导分化培养基预混液，重悬细胞，150g 离心5min。小心弃去.上清，加入0.5 mL成软骨诱导分化培养基诱导.液，重悬细胞，150 g离心5 min。将15 mL离心管的管盖稍稍旋开，放置于37°C，5% CO2培养环境下培养。

2. 细胞分化诱导

24h后观察细胞沉淀形变团聚的情况，如有明显的变化，则小心轻柔地拨动管底，尝试让细胞团脱离管底，全部浸润在诱导液中。

置于37°C, 5% CO2培养环境下培养约21天，通常每2天更换一次新鲜配制的成软骨诱导分化培养基诱导液。注意观察细胞团成球情况及表面光滑度，决定终止细胞诱导的时间，并进行染色鉴定。

3. 染色鉴定

3.1 软骨球固定

将软骨球从离心管中转移至EP管,并使用1xPBS清洗两次，最后置于适量的4%中性甲醛溶液中。

3.2 石蜡包埋切片

软骨球经石蜡包埋后切片。

3.3 阿利辛蓝染色

将石蜡切片脱蜡和脱水，使用阿利辛蓝染色液染色30 min，用自来水冲洗2 min,蒸馏水冲洗1次。

3.4 诱导评估

显微镜下观察成软骨染色效果，并进行图像采集和诱导评估。诱导成功时，软骨组织中的内酸性粘多糖可被阿利辛蓝染成蓝绿色。

NOTE:干细胞的成软骨分化水平因细胞类型、细胞供体来源，培养条件、细胞代次、细胞状态和分化时间等因素而异

1.1 明胶包被培养器皿

干细胞培养较长时间后，可能会出现脱壁卷边或漂浮现象，建议使用0.1%明胶溶液对培养器皿进行包被。准备合适的培养器皿，取适量明胶覆盖底面37°C静置30 min,吸取晾干即可使用。

1.2 接种干细胞

取对数生长期的细胞，按照2.0x 10e4cells/cm2的细胞密度接种至包被后的培养器皿中,于37°C，5%CO2培养环境下培养至汇合度60~70%，弃掉上清，加入成骨诱导分化培养基。

1.3 细胞分化诱导

于37°C, 5%CO2培养环境下培养约14~21天，每2~3天换液一次，并注意观察细胞形态变化。根据细胞钙盐结晶析出和钙质结节形成的情况,决定终止细胞诱导的时间，并进行染色鉴定。

2. 染色鉴定

2.1 细胞固定

吸去培养基使用适量1xPBS清洗一次，弃去后取适量4%中性甲醛溶液覆盖培养器皿底面，室温固定30~ 60 min,弃去固定液再使用1xPBS清洗两次。

2.2 茜素红染色

加入适量茜素红染色液染3~5 min,吸走茜素红染色液，用1xPBS清洗两次，并加入适量1xPBS避免细胞干燥。

2.3 诱导评估

显微镜下观察成骨染色效果，并进行图像采集和诱导评估。诱导成功时，钙质结节与茜素红染料结合后呈现红色或橘红色。

NOTE:干细胞的成骨分化水平因细胞类型、细胞供体来源，培养条件、细胞代次、细胞状态和分化时间等因素而异。

造血干细胞的分化示意

多能造血干细胞--定向多能造血干细胞--定向单能干细胞（祖细胞）--成熟非增殖血细胞--骨髓造血

分为红系，粒系，淋巴系，单核细胞，浆细胞，血小板

具体过程大同小异，基本遵循祖细胞——原始细胞——幼稚细胞——成熟细胞的规律

原始红细胞会经过早幼，中幼，晚幼过程分化为普通红细胞，早幼粒会分化为中性，嗜酸性，嗜碱性，血小板由巨核细胞脱落而来

骨髓造血干细胞的分化

干细胞的分化基本可以分为纵向和横向两种

骨髓血造血干细胞纵向可以分化为血液细胞,如血细胞、白细胞、血小板

在一定的诱导条件下，还可以横向分化为成骨、软骨、脂肪等

骨髓造血干细胞,神经组织干细胞,胚胎干细胞的分化程度

(1)分裂和分化 (2)没有细胞核 (3)效应B细胞、记忆B细胞、效应T细胞、记忆T　抗原 (4)神经组织干细胞、骨髓造血干细胞、胚胎干细胞 各种组织和细胞的形成是细胞分裂和分化的结果，细胞分化的原因是基因的选择性表达；成熟的红细胞没有细胞核，所以不具全能性；B细胞分裂分化形成的是效应B细胞和记忆B细胞；T细胞分裂分化形成的是效应T细胞和记忆T细胞，它们的形成需受抗原刺激；由图看出，胚胎干细胞可分化为骨髓造血干细胞和神经组织干细胞，因此胚胎干细胞的分化程度最低。骨髓造血干细胞又可分化为多种细胞，而神经组织干细胞主要分化为神经细胞，因此骨髓造血干细胞的分化程度较神经干细胞低。

t细胞和b细胞都是由骨髓造血干细胞分化发育而来

A、吞噬细胞和T细胞识别抗原都需要细胞膜上糖被的参与，抗体主要存在血清中，故与抗原结合过程主要发生在内环境中，A正确；

B、图中的B细胞和T细胞都由骨髓造血干细胞分化而成，B细胞在骨髓中发育成熟，而T细胞在胸腺发育成熟，B正确；

C、一种抗原往往具有多个决定簇，一个效应B细胞只能产生一种特异性的抗体，C错误；

D、二次免疫之所以能够短时间产生大量抗体消灭抗原，是因为④记忆细胞可以迅速增殖分化为大量浆细胞，产生大量抗体，D正确．

故选：C．

骨髓中的前体细胞是什么

很多肿瘤患者在放化疗的过程中会发生骨髓抑制。当出现三度或四度骨髓抑制的时候，就会打升白针、升板针；当血红蛋白小于60g/L的时候就会输血；二度或三度抑制的时候就会打促红细胞生成素。而患者在接受这些治疗后，往往也会发现一些问题，当打完升白针的时候，往往维持的时间比较短，有时候患者会出现骨骼肌肉疼痛；皮下注射升板针的时候，会发现起效慢，需要连续注射5天才会起效。如果输注血小板，外源性血小板的寿命通常维持72小时左右，反复输注血小板还会产生抗体；在输血的时候，也会发现指标上升很快，但下降也很快。打促红细胞生成素，有效率最高可维持在50%左右，并且炎症性贫血很容易被忽略。这些都是我们在临床治疗中使用的方法并且发现的局限性。为什么会出现这样的问题呢？我们从正常的造血流程来了发际线怎么做的解一下。

文章的主图是一张正常的造血流程图。请一边看图，一边看文字解释。

一、正常血细胞生成过程

造血干细胞在造血微环境中分化为三系（白细胞、红细胞、血小板）组细胞，三系组细胞在各造血因子的作用下，分化为各血细胞前体细胞，前体细胞在良好的环境和充足的营养组分条件下，进一步分化为成熟的血细胞，进入血液循环中。

血细胞生成的关键因素：（1）造血微环境和造血干细胞；（2）造血因子的数量和敏感性；（3）血细胞的营养组分。

1、红细胞生成过程

骨髓造血干细胞，在造血微环境中分化为红系定向祖细胞，在促红细胞生成素（rhEPO/CHO）的作用下，分化为红系前体细胞，又在蛋白质和铁、以及维生素B12、叶酸等微量元素的参与下，分化为成熟的红细胞。

2、中性粒细胞生成过程

骨髓造血干细胞，在造血微环境中分化、增殖为粒系定向祖细胞，在粒细胞集落刺激因子（G-CSF）的作用下，分化为粒系前体细胞，最终分化为成熟的中性粒细胞。

3、血小板生成过程

骨髓造血干细胞，在造血微环境中分化、增殖为巨核系定向祖细胞，在白介素11（rhIL-11）的作用下，分化为巨核系前体细胞，进而分化为巨核细胞，最终在促血小板生成素（rhTPO）的作用下，分化为成熟的血小板。

以上这些步骤是我们人体正常的造血流程。在放化疗后，这个正常的造血流程遭到了生殖抗衰是什么破坏，使骨髓产生了抑制，在出现血细胞降低的时候会应用相应的治疗方法，同时也出现一些局限性，为什么会是这样呢？

二、被破坏的造血流程

1、种子、土壤遭到破坏，放化疗引起骨髓器质性损伤。

造血微环境相当于土壤，造血干细胞相当于种子，造血微环境中的基质细胞起到了保护造血干细胞的作用。而放化疗产生大量氧自由基；可诱导基质细胞凋亡，破坏它的网状结构，损伤了造血微环境；造血干细胞失去造血微环境保护，暴露在大量的氧自由基的环境下，致使其加速衰老、不正常凋亡，这就从造血的源头损伤了造血能力。

2、造血因子的数量减少，敏感性降低。

放疗化疗加重了肿瘤患者的慢性炎症表现，而炎症表现会降低造血因子的敏感性。同时，化疗放疗导致的其他脏器的损伤会使得造血因子的生成减少。因此，三系的组细胞向前体细胞分化的能力下降，最终使得三系血细胞的数量减少。

3、造血原料缺乏。

肿瘤患者在肿瘤治疗的过程中，营养的消耗大，而摄入又不够，导致体内的蛋白质、铁、维生素B12、叶酸等造血所必需的原料缺乏。

三、在治疗骨髓抑制过程中，你没有考虑的因素

通过上述分析，当出现不同程度的骨髓抑制的时候，患者会打升白针、促红素、促血小板生成素，这个时候忽略的第一个问题是种子（造血干细胞）和土壤（造血微环境）已经在源头受破坏或受抑制，因此通过打升板针、促红素、促血小板生成素会出现自身局限性。忽略的第二个问题是由于肿瘤患者存在的炎症问题，使得造血因子敏感性差，这也使得骨髓抑制干预后效果不理想的原因。第三个被忽略的问题是身体所处的营养状况。如果原料不足，使得医学干预骨髓抑制效果因人而异。

因此，无论是患者、患者家属都需要关注患者自身营养状况，树立营养骨髓的观念，营养配合治疗，让医学治疗手段发挥更优的效果。缓解骨髓抑制，需要关注骨髓营养补充、自身炎症降低、造血原料的补充。食物是基础，若达到更优的效果从治疗开始配合营养骨髓精准营养干预方案，从源头营养造血干细胞、维护造血微环境、降低体内炎症，这样会使骨髓抑制的临床治疗效果更好。