小鼠骨髓间充质干细胞传代次数（大鼠骨髓间充质干细胞）

干细胞储存,能保存多久,老了真的能用上吗

存储类型

一是佰草集哪个系列抗衰老效果好新生儿类：包括婴儿脐带血造血干细胞、脐带间充质干细胞、胎盘亚全能干细胞、胎盘造血干细胞；

二是成人类：包括成人脂肪干细胞、外周血干细胞、成年女性宫内膜（经血）干细胞。

脐带血造血干细胞

脐带血是胎儿娩出、脐带离断后残留在胎盘和脐带中的血液。

医疗价值 

脐血中含有大量未成熟的造血干细胞，可以重建人体造血和免疫系统的造血干细胞，并可治疗多种重大疾病，包括血液系统恶性及非恶性疾病(白血病、再生障碍性贫血) 、实体肿瘤、自身免疫系统疾病（常规性的造血干细胞移植需要组织配型相合，无关供体之间配型相合的几率仅为 15-20 万分之一，出现免疫排斥反应，影响移植效果。而自体脐血干细胞具有完美的组织配型，无免疫排斥反应，提高移植的成功率。亲属间有 1/2-1/4 配型相合的几率，自体脐血干细胞的保存为孩子和家人增添了一份生命保障）。

非血液病治疗，包括糖尿病、风湿免疫病、脑瘫等。

与骨髓干细胞和外周血干细胞相比，新生儿脐带血干细胞的异体排斥反映小，免疫原性低，再生能力和速度是前者的10—20倍。

临床应用 

世界范围内，脐血的综合使用比率超过1/10，远超骨髓库1/1000的使用率，已经成为造血干细胞临床移植术医生的新选择。

脐带血间充质干细胞

间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cell，MSC），具有亚全能分化潜能，在特定环境下，能够诱导分化成为多种组织细胞——如神经、心脏、肝脏、骨、软骨、肌腱、脂肪、上皮等多种细胞，能够为多种疾病的治疗提供宝贵的原材料。

一根脐带能够提取间充质干细胞的数量相当于成人5000ml骨髓中的含量，并且纯度高、活性高，品质优良，体外增殖能力强，是理想的间充质干细胞来源。

医疗价值 

我细胞分化的原因及特征国已开始用间充质干细胞治疗临床上一些难治性疾病，如脊髓损伤、脑瘫、肌萎缩侧索硬化症、系统性红斑狼疮、系统性硬化症、克隆氏病、中风、糖尿病、糖尿病足、肝硬化等。

临床实践表明，间充质干细胞众多疾病的治疗均疗效明显。

1、造血干细胞移植：增强造血功能；促使造血干细胞移植物的植入；治疗移植物抗宿主病。

2、组织损伤的修复：骨、软骨、关节损伤、心脏损伤；肝脏损伤；脊髓损伤和神经系统疾病。

3、自身免疫性疾病：系统性红斑狼疮、硬皮病、炎性肠炎等。

4、作为基因治疗的载体。

5、抗衰老及护肤美容。

存储意义 

对于新生儿：是成长过程中一份最好的健康保障。

对家庭成员：家庭成员之间使用不需要配型，疗效好（亲缘关系越近治疗效果越好）。

脂肪干细胞

脂肪干细胞（adipose-derived stem cells，ADSCs），是从人体脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞，属于间充质干细胞的一种。可以分化成和修复多种器官和组织。

自体脂肪干细胞从人体组织中取出，经分离、纯化、体外培养后，使未完全分化的细胞不断分化生长。同时，将衰老细胞优化，使其拥有旺盛的增殖活力（无限接近于青春值的巅峰状态）。经大量扩增后，满足各种治疗或抗衰保健的需要。

功能与应用 

脂肪干细胞可以分化成——

1、脂肪细胞：多应用于面部美容、丰胸、美体。

2、成骨细胞: 应用于股骨头缺血性坏死、骨折等。

3、软骨细胞: 骨关节炎、骨软骨。

4、心肌细胞：心肌梗死、高血压等。

5、肌细胞：应用于肌腱、 韧带损伤。

6、神经细胞：应用于中风、脑血栓、多发性硬化症。

7、胰岛细胞： 应用于糖尿病。

8、肝细胞： 应用于肝脏疾病。

9、细胞因子：脂肪干细胞还能分泌一定数量的细胞因子及多种促进血管生成因子和凋亡因子，并能通过旁分泌作用于成纤维细胞，促进其分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原和纤连蛋白,促进胶原合成，可发挥抗炎、抗氧化、抗衰老、损伤修复等作用。

资源优势 

1、来源丰富：人体内的脂肪干细胞储量丰富、少量组织即可获取大量干细胞（每克脂肪可获得5000CFU-F脂肪干细胞）。

2、浓度高品质好：脂肪中干细胞浓度比骨髓大500-2000倍。

3、易获取无痛苦：通过微创吸脂获得，对机体无损伤，痛感小。

4、扩增快而稳定：体外稳定增殖，安全、可靠、有效。

胎盘造血干细胞

胎盘造血干细胞，是存在于胎盘组织中的一族高度未分化的原始细胞。它不仅是血细胞（红细胞、白细胞、血小板等）的宗祖，还可跨系统分化为各种组织器官的细胞。

医疗价值 

可用于70余种血液系统疾病和免疫系统疾病的治疗。包括：急性白血病、慢性白血病、骨髓增生异常综合征、造血干细胞疾病、骨髓增殖性疾病、淋巴增殖性疾病、巨噬细胞疾病、遗传性代谢性疾病、组织细胞疾病、遗传性 红细胞疾病、遗传性免疫系统疾病、遗传性血小板疾病、地中海贫血、非血液系统恶性肿瘤、急性放射病等。

存储意义 

胎盘造血干细胞的含量是脐带血中造血干细胞含量的8-10倍，可能供小孩自用多次，甚至可满足1-2个成人患者的治疗。

同时，将有效解决移植时骨髓不足、外周血来源不足、脐血数量不足等难题。有望取代骨髓、动员后外周血和脐带血用于异基因或同基因（小孩本人的）造血干细胞移植。

胎盘亚全能干细胞

胎盘亚全能干细胞，是来源于新生儿胎盘组织的、介于全能和多能干细胞之间的一种干细胞，也是人体200多种组织细胞的母细胞。目前可定向分化为血液、皮肤、神经、组织、肝脏等多种干细胞,是最理想的种子细胞。

医疗价值 

胎盘亚全能干细胞具有强大的增殖能力和多向分化潜能，在适宜环境下具有分化为间充质干细胞、上皮干细胞、神经干细胞、肝干细胞，肌细胞、成骨细胞、软骨细胞、基质细胞等多种细胞的能力。可以用来修复受损或病变的组织器官，治疗心、脑血管疾病、神经系统疾病、肝脏疾病、骨组织病、角膜损伤、烧伤烫伤、肌病等多种疾病。

同时具有免疫调节作用，分泌多种抑制炎症的因子，通过负性免疫调节功能，抑制机体亢进的免疫反应，使机体免疫功能恢复平衡，用来治疗克隆氏病、红斑狼疮，硬皮病等自身免疫系统疾病。

宫内膜干细胞

宫内膜干细胞（Menstrual Blood derived stem cells,MenSC），是从伴随女性经血脱落的子宫内膜组织中分离得到的间充质干细胞。是具有增殖能力强 、不导致染色体变异、不导致肿瘤发生的多能干细胞。

特点及资源优势 

1、资源丰富：宫内膜经血中干细胞含量丰富，是骨髓干细胞的30倍，有望成为最大的干细胞来源。

2、体外增殖能力强：24小时扩增一倍，可增殖390次，传代高达50次。

3、分化潜能大：能表达Oct-4 、SSEA-4和CD 117等干细胞标志物，与胚胎干细胞和骨髓干细胞相近，表明在再生医学上的巨大潜能。

4、免疫原性低：无需经过严格配对使用，异体移植无免疫排斥反应或反应较弱。

5、采集方法简单：经血采集简单、无痛。

功能与应用 

宫内膜经血干细胞具有多分化可塑性，可分化为不同的细胞类型，包括骨组织细胞、血管细胞、脂肪细胞、神经细胞、肝细胞、肺细胞、心脏细胞、胰腺细胞等。

可用于治疗脑中风、帕金森症、心源性肝硬化等疾病。

宫内膜干细胞向组织细胞分化，可治疗内膜损伤，对宫内膜过薄、内膜病变进行内膜修复。可治疗不孕不育症。

干细胞已经成为当今生命科学的前沿和热点。基于干细胞修复与再生能力的再生医学，有望解决人类面临的重大医学难题，帮助人类实现修复创伤和病理组织、治愈终末期疾病的梦想，引发继药物和手术之后的新一轮波澜壮阔的医疗技术革命。

高质量的治疗以及高质量的干细胞制剂研发制备离不开干细胞存储。国务院颁布的《“十三五”国家战略性新兴产业发展规划》强调，依托并整合现有资源，建设一批创新基础平台、支持干细胞库的建设。国内优质干细胞库不仅为行业提供了优质的干细胞存储服务，还大力推动我国干细胞治疗的发展，致力于让干细胞造福更多人！

本文由广州穿越时空生物提供，想了解更多关于干细胞储存知识，可以关注它。

干细胞打入大鼠的量是多少

SCSP number:

SCSP-402

细胞名称:

SD大鼠骨髓间充质干细胞

细胞描述:

大鼠骨髓间充质干细胞

大鼠品系:

SD大鼠

细胞来源:

SCSP取4周龄的SD大鼠骨髓，自行分离制备

SCSP 培养液:

MSC完全培养液：SCSP-615

α-MEM medium with GlutaMAX™-I （Gibco 32571） 500 ml

FBS（Biochrom S0115） 56 ml

Pen Strep（Gibco 15140） 5.6 ml

细胞说明:

取自SD大鼠骨髓，通过机械法在无菌环境下分离，使用MSC完全培养液贴壁培养，传代扩增至第二代冻存。集落形成率5%，CD29、CD90表达率70%, CD34、CD45、CD11b表达率5%，具备分化成为脂肪、成骨、软骨的能力。

细胞代数

P2

细胞总数/每支:

106

体积/每支:

500µl

传代方法:

待细胞长满至90%时，用0.05%胰酶消化，按照2x104/cm2传代或按1:2-1:3比例进行传代。

传代周期：3-5天 传代比例：1:2-1:3 换液频率：3天

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃

冻存液：

培养液80%，FBS10%，DMSO 10%

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研究小鼠骨髓间充质干细胞与中性粒细胞共培养后，中性粒细胞对T细胞免疫的影响，并探索其分子机制，以及共培养诱导后的中性粒细胞对小鼠4T1肿瘤进展的影响。 方法： (1)通过体外分离培养与提纯小鼠骨髓间充质干细胞，骨髓中性粒细胞。 (2)通过体外共培养体系，Annexin-V-PI标记，流式细胞仪检测中性粒细胞凋亡情况。 (3)体外共培养后中性粒细胞影响T细胞增殖实验：通过Anti-CD3抗体刺激T淋巴细胞增殖，并用CFSE检测其增殖率，同时检测部分T细胞激活

动物细胞传代顺序

动物细胞传代培养的操作步骤

1.观察培养基是否正常，细胞状态如何，细胞密度如何，决定是否传代。观察时拧紧盖子。

2.加热PBS、versene、培养基，(提前做好) 瓶子不要倒着放，不要让液体接触到瓶塞。

3.打开超净台(先开风机，后开照明)，用75%乙醇清洁台面，点燃酒精灯。不要把废液缸拿出去倒，如果废液太多，可以用其他容器先装废液。取小离心管一个，置于架子上。

4.取尖吸管、吸量管各一支，放置在专用的架上。放置的方式，注意吸管、吸量管前端都不要与架子接触。

5.取待传代的细胞。打开versene，用酒精灯外焰烧。烧吸管时距离酒精灯心远些，不要把渣滓带进去。把试剂拿入台子的时候，尽量平稳，不要让试剂碰到瓶口。

6.用吸量管吸取旧的培养基，置离心管中，吸量管加入versene，然后将versene瓶收起来。(加versene主要是为了将旧培养基洗去)。在离心管中间部分将液体加入。吸液体和加液体时都不要对着细胞。

7.打开胰酶，然后将versene弃掉。换新管，用尖吸管吸取适量胰酶加入。加胰酶后，尽快放平，使细胞消化时间一致。

8.将细胞放入37度孵箱。放孵箱2min, 收胰酶，打开PBS. 之后拿出来镜下随时观察。使用二次消化法，去除容器中残余的细胞。别忘了用旧培养基中和。

9.取细胞，镜下观察消化情况。消化程度合适之后(细胞变圆，但不漂起)，用尖吸管弃去胰酶，取离心管中的培养基加入细胞，吹打，至所有细胞从培养皿底部脱落下来。用PBS洗细胞，versene对细胞有毒性，且不能被血清中和。然后吸取至离心管中，800 rpm离心5分钟。

10.吸量管吸取适量培养基加入新的培养皿中。

11.细胞离心毕，用吸新培养基的管弃去上清，先把泡沫吸走。换吸量管吸取培养皿中培养基适量，加入离心管，小体积混匀，将细胞重悬，尖吸管吹匀。

12.擦计数板，用枪吸10ul的液体，计数。不要把枪伸到离心管内。

13.吸量管吸取细胞悬液，加入新的培养皿中。镜下观察，摇匀，放入37度孵育。收超净台。