广东大鼠原代干细胞一般多少钱（广东大鼠原代干细胞一般多少钱）

为什么灌注法分离得到的心肌细胞不贴壁

与实验样品的鼠龄有关，大鼠出生时间越短，其心肌细胞分离后成活率越高，越容易贴壁生长.大量观测表明，选择1~3 d龄大鼠分离其心肌细胞进行原代培养较为理想.其中尤以半日龄大鼠心肌细胞培养效果最佳.

大鼠原代肝细胞分离，活率一直上不去，求助大神

肝细胞分离，有两个问题要注意的，就是一定尽量要快，时间长了干细胞动能素是什么影响细胞活力；另一个就是操作最好在冰上进行，还有大鼠要小点的，150-200g就可以了。消化应的问题，还是自己摸索为好，如果觉得多了可以试着减少用量吧。

你试下下面这个配方：

配方   前灌流 g/L  酶配制液 g/L

NaCl   8   8

KCl   0.4   0.4

CaCl2   - 0.56

NaHPO4·2H2O   0.078 (无水0.0599)   0.078

Na2HPO4·12H2O   0.151   0.151

HEPES   2.38 2.38

Phenol red 0.006   0.006

EGTA 1.19   -

NaHCO3   0.35   0.35

Glucose   0.9   -

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请教大鼠卵巢颗粒细胞原代培养的问题

一、原理

将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。

二、仪器、材料及试剂

仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃）

材料：胎鼠或新生鼠

试剂：1640培养基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank’s液，碘酒

三、操作步骤

（一）胰酶消化法

1.器材：将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死，置75%酒精泡2-3秒钟（时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内）再用碘酒消毒腹部，取胎鼠带入超净台内（或将新生小鼠在超净台内）解剖取组织，置平皿中。

2.用Hank’s液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。

3.用手术剪将组织剪成小块（1mm3），再用Hank’s液洗三次，转移至小青霉素瓶中。

4.视组织块量加入5-6倍体积的0.25%胰酶液，37℃中消化20-40分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。

5.加入3-5ml培养液以终止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制剂）。

6.静置5-10分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中。

7.1000rpm，离心10分钟，弃上清液。

8.加入Hank’s液5ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。

9.加入培养液1-2ml（视细胞量），血球计数板计数。

10.将细胞调整到5×105/ml左右，转移至25ml细胞培养瓶中，37℃下培养。

细胞分离的方法各实验室不同，所采用的消化酶也不相同（如胶原酶，透明质酶等）。

（二）组织块直接培养法

自上方法第3步后，将组织块转移到培养瓶，贴附与瓶底面。翻转瓶底朝上，将培养液加至瓶中，培养液勿接触组织块。于37℃静置3—5小时，轻轻翻转培养瓶，使组织浸入培养液中（勿使组织漂起），37℃继续培养。

DNA损伤修复的实践意义

各种原因引起的DNA损伤可以通过各种方式修复。如果修复功能有缺陷,DNA损伤就可能造成两种结果：一是细胞死亡；二是发生基因突变,或进而恶性转化为肿瘤细胞。先天性DNA修复缺陷疾病患者容易发生各种恶性肿瘤，例如人类的着色性干皮病患者的皮肤对阳光过度敏感, 照射后出现红斑、水肿,继而出现色素沉着、干燥、角化过度,结果可导致黑色素瘤、基底细胞癌、鳞状上皮癌及棘状上皮瘤的发生。通过细胞融合的研究表明具有不同临床表现的该病患者有明显的遗传异质性,可以分为A、B、C、D、E、F、G七个互补群及变种,A-G互补群表现为不同程度的核酸内切酶缺乏引起的切除修复功能缺陷，变种的切除修复功能正常，但复制后修复的功能有缺陷。又如范可尼贫血临床主要表现的特征如再生障碍性贫血、生长迟缓、易患白血病等是由于先天性链交联等修复缺陷所致。其他注射干细胞美容费用是怎么计算的如布卢姆氏综合征和毛细血管扩张共济失调患者都易患白血病和淋巴肉瘤，也是先天性DNA修复缺陷造成的。

值得注意的是DNA修复功能缺陷虽可引起肿瘤的发生,但已癌化细胞本身的DNA修复功能并不低下,相反地却显著地升高，并能够充分地修复化疗药物引起的DNA损伤, 这也是大多数抗癌药物不能奏效的原因。地鼠细胞的DNA损伤修复的方式以复制后修复为主, 如果在地鼠的浆细胞瘤细胞的培养物中加入环磷酰胺等抗癌药后，瘤细胞照样生长，如果加入环磷酰胺的同时再加入咖啡因（复制后修复的抑制剂），则瘤细胞的生长受到了明显的抑制。所以DNA修复的研究可为肿瘤联合化疗提供方案。 DNA修复的研究已被应用于检测各种化学致癌物。一般的方法是在体外传代培养的正常人皮肤成纤维细胞或大鼠原代培养的肝细胞中加入被检物,培养一定时间后再加入继续培养，然后收集细胞作放射自显影或液体闪烁的测试，如果参入量显著增高，表明被检物可疑为诱变剂或致癌剂。微生物培养的方法则更为简便、迅速，例如可以用枯草杆菌重组功能发生缺陷的突变型来进行检测，这些突变型由于丧失了重组功能而不能进行重组修复，因而更容易为许多诱变剂和致癌剂所杀伤致死。

关于DNA修复机制方面的许多问题还有待于进一步的研究阐明。例如从原核生物开始到真核生物的高等哺乳类动物各依靠哪些方式来修复受损伤的DNA分子,修复方式又是怎样随物种的进化而发生演变的，修复缺陷的遗传异质性的本质又是什么,免疫缺陷和DNA修复功能缺陷的因果关系又是怎样的等等。

原代肝细胞中分离死细胞和活细胞

其实很简单，对于成年大鼠而言，注意下面几项即可：

1.两部灌流法的灌流液，ph值，氧气等因素，以及灌流时间很重要

2. 如果血细胞去的非常干净，可以不用percoll分离

3，用低速离心（50g 2 min），死细胞在上层。

4. 台盼蓝检测后基本95%以上活性。我外泌体超速离心会沉到离心管哪个位置分离的通常在99%以上活性。成鼠肝细胞元代培养很难增值，但是维持1个月没问题。

我曾给你回复过一次，你没反应。这是最后一次。看看我培养的大鼠原代细胞图片（48小时后），是不是比文献上发表的都漂亮。

哈哈

祝实验顺利！

如何保存大鼠腿骨组织，取骨过程是否要求绝对严格无菌？准备提取骨髓间充质干细胞进行原代培养。

没那么严格要求的 我们这边有做组织工程的实验室 早上去菜市场还是屠宰场的 买了骨头 然后拿回去取细胞培养都没问题的