人干细胞培养电子版书（细胞培养书籍）

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干细胞的秘密

作者：tier

开篇 老教授的离奇遭遇

更新时间2009-4-17 19:18:01 字数：3995

　《干细胞的秘密》

大自然本是高傲的，许多事情都可以说明这一点。它依照自己的规律运行。每当它想要发怒，就抛出灾难，涂炭生灵。每当它心情舒畅，又会尽显慷慨。它送来甜美和温馨的东西，当人们遇到了，就会不由自主的打心眼儿里感到舒服。比如,在冬季晴朗的日子里,当明媚的阳光穿过窗户射进屋里，暖暖的抓挠着你全自动外泌体分析仪未被衣服遮盖住的皮肤，把一股热流缓缓注入皮肉，令人产生一种昏昏欲睡的动向，难以抗拒。那么懒意就随之而来，懈怠也由然而生。

然而,很多时候,有得就得有失。好比那句老话说的，“天上不会掉馅饼”。老天爷的恩惠也往往需要回报，如果只知道沉湎于获取的快乐和满足之中，而忘记了还应该做点别的什么，代价就要不期而至了。它可能会是沉重的，也可能无法挽回。

同样是在一个能够让人倦意丛生的冬天里的下午，阳光明媚。在中国北方某个大城市的一所高校里，一堂普通的生物学课正在进行。这种循规蹈矩的教育活动在这幢老式楼房里周而复始，年复一年，已经有很长一段历史。该校也正是因此而声名远播。

课讲的是《现代生物进化理论简介》，三十几位听众。讲师是一个老教授，六十多岁。他是生物系最年长的留任教授，也最受大家的尊敬。他穿着干净朴素，举止稳健。班白的头发梳理的很整齐。浑身上下除去右腕上一块高档瑞士手表以外，再没有其它稍具档次的……

请采纳

简要概述：人体干细胞包括多少种类

干细胞即为起源细胞。在几年来，干细胞已经广泛的应用于医疗事业中，可以说干细胞对我外泌体提取试剂盒天根们来说已经不陌生，但是，说起人体干细胞包括多少种类，很多人就都不了解了，北京细胞渗透修复中心的专家给我们做了介绍。 人体干细胞分两种类型 一种是全功能干细胞，可直接克隆人体；另一种是多功能干细胞，可直接复制各种脏器和修复组织。人类寄希望于利用干细胞的分离和体外培养，在体外繁育出组织或器官，并最终通过组织或器官移植，实现对临床疾病的治疗。 原位培植皮肤干细胞再生新皮肤技术不仅实现了利用干细胞复制皮肤器官，而且做到了人体原位皮肤器官的复制，从而使人类从干细胞体外培植组织成器官移植治疗，直接跨入了人体原位干细胞复制器官。科学家普遍认为：干细胞的研究将为临床医学提供更为广阔的应用前景。 干细胞具有经培养不定期地分化并产生特化细胞的能力。在正常的人体发育环境中，它们得到了最好的诠释。人体发育起始于卵子的受精，产生一个能发育为完整有机体潜能的单细胞，即全能性受精卵。受精后的最初几个小时内，受精卵分裂为一些完全相同的全能细胞。这意味着如果把这些细胞的任何一个放入女性子宫内，均有可能发育成胎儿。实际上，当两个全能细胞分别发育为单独遗传基因型的人时，即出现了各方面都完全相同的双胞胎。大约在受精后四天，经过几个循环的细胞分裂之后，这些全能细胞开始特异化，形成一个中空环形的细胞群结构，称之为胚囊，胚囊由外层细胞和位于中空球形内的细胞簇(称为内细胞群)所构成。 外层细胞继续发展，形成胎盘以及胎儿在子宫内发育所需的其它支持组织。内细胞群细胞亦继续发育，形成人体所须的全部组织。尽管内细胞群可形成人体内的所有组织，但它们不能发育为一个单独的生物体，因为它们不能形成胎盘以及子宫内发育所需的支持组织。这些内细胞群细胞是多能性的----它们能产生许多种类型的细胞，但并非胎儿发育所需的全部细胞类型。因为它们不是全能性的，不是胚胎，没有完全的发育潜能。如果内细胞群被放入女性子宫，它不会发育成胎儿。 多能性干细胞经历进一步的特异分化，发展为参与生成特殊功能细胞的干细胞。如造血干细胞，它能产生红细胞、白细胞和血小板。又如皮肤干细胞，它能产生各种类型的皮肤细胞。这些更专门化的干细胞被称为专能干细胞。 以上就是对人体干细胞包括种类的概括，希望对您能起到帮助，同时，北京细胞渗透修复中心的专家也表示，面前，治疗小儿脑瘫、帕金森、重症肌无力等神经类方面急症，干细胞移植技术是临床效果最好、后遗症最小、对身体也无影响的最佳疗法。

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简介：自《动物细胞培养——基本技术和特殊应用指南》第 6 版发行以来，细胞培养领域已取得诸多进展，第 7 版除保留基本内容（培养细胞的生物学、细胞培养实验室的设计与布局、培养器皿与培养基、原代培养、细胞系及其鉴定、污染、分化、老化、永生化等）之外，特别强化了某些章节的内容，尤其见于 3D 培养、干细胞、特殊类型细胞培养、STR 测序、规模化培养等的介绍，因此第 7 版无论是在理论上还是在技术上均更具新颖性和实用性。  

2019-12-06

人正常肝细胞（ WRL68 ）的培养方法

细胞特性

2. 形态： 贴壁生长

3. 含量： 1x106

4 . 污染： 支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5. 规格： T25瓶或者1mL冻存管包装

WRL68是目前唯一能提供的人正常干细胞，之前很多人一直在问LO2,但是就目前情况来说，LO2在建系的时候就被海拉细胞污染了，所以基本无法提供，所以WRL68的重要性就凸显出来了。

运输和保存： 可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。

细胞用途： 仅供科研使用。

细胞接收后的处理：

1.观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。

2.贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。

3. 悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。

4.备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议1：2传代 。

细胞培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1.准备MEM（推荐iCell-0012）培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2.培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配

二.细胞处理

1.复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2.细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

A 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

B 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

C 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀

D .将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

注 ： 第一次传代推荐传代比例为 1:2 ，以后传代比例可根据客户需要自己决定。

3. 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25瓶为例

A.细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

B.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

C.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

注意事项：

1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

人体干细胞培养液能用在化妆品上吗？

首先，你说的是韩国化妆品，不是中国的化妆品，国际上在2010年的《国际化妆品原料字典和手册（第十二版）》已收录了干细胞培养液作为化妆品原料。编号13267，除此之外还有好几种细胞培养液均在国际化妆品原料手册上，不行您可以查询。中国目前没有统一的化妆品原料清单，国家这些年一直再根据化妆品生产企业的申请和国际上的主流化妆品研发技术，一直在增加化妆品原料清单的内容，比如说，2013年2月的中国该化妆品清单目录上是8000多种，2013年12月又出了新的化妆品原料清单增加到1万多种，目前用的是2015年版本的中国化妆品原料清单，且经常会调整和增加。

作为化妆品生产企业，我国由于没有统一固定化妆品原料清单，搞的很被动，经常是化妆品原料供应商通知我们，他的原料可以用于化妆品原料，有时候申报上去了，评审专家才通知某个原料需要申请。甚是被动，严重影响中国化妆品研发水平。