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诱导多能干细胞生成的方法(诱导多功能干细胞是如何产生)

max2023-01-14干细胞知识62

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诱导干细胞的分化的方法有哪些

诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells, iPS cells)最初是日本科学家山中伸弥(Shinya Yamanaka)于2006年利用病毒载体将四个转录因子(Oct4, Sox2, Klf4 和c-Myc)的组合转入分化的体细胞中,使其重编程而得到的类似胚胎干细胞和胚胎APSC多能细胞的一种细胞类型。通过采用导入外源基因的方法使体细胞去分化为多能干细胞,对于这类干细胞我们称之为诱导多能干细胞。

请问诱导干细胞的分化的方法有哪些啊?

自1981年英国的Evans等从小鼠囊胚的内细胞团(Inner cell mass,ICM)分离建立胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ES细胞)以来,ES细胞的研究就一直是各国研究的热点。近两年,ES细胞分化诱导以及调控方面的研究取得了外泌体在医美领域的应用很多重要的进展,已从ES细胞诱导出神经细胞、心肌细胞、血管和内皮细胞等。利用ES细胞的定向分化可望在基因研究、细胞治疗和组织器官替代治疗等的研究中发挥重要作用。

1.常用的体外诱导方法是在体外培养的成体干细胞中加人入诱导因子。诱导因子包括各种能影响细胞分化的物质,如血清、糖分、维生素、以及各种蛋白因子等。

2.日本学者Oh等首先报道,高浓度肝细胞生长因子(HGF)体外诱导大鼠骨髓细胞分化为肝细胞,并表达CK8, CK18, ALB等。

3.2002年,Schwartz等将大鼠、小鼠和人的多能成体前体细胞(MAPC)接种到铺有基质明胶或纤维连结素的培养瓶中,用60%DMEM(低糖型)+ 2% FCS培养体系培养,并加入HGF和/或成纤维细胞生长因子-4(FGF-4),在培养的第7天,MAPC分化为表达肝细胞核因子-3BETA,GATA-4 ,CK-19和AFP的上皮样细胞,在第14-28天,这些上皮样细胞表达CK-18, HNF-4和HNF-1 alfa。大约在第21天,CK-18和ALB染色阳性。这些上皮样细胞也具有肝细胞功能特征:分泌尿素和白蛋白,能摄取低密度脂蛋白并贮存糖原。

4.结果表明,用HGF和FGF-4在体外能将MAPC诱导分化成具有形态、表型和功能特征的肝细胞。实验表明,FGF-4单用可诱导肝细胞分化,用HGF处理的细胞分化程度更高。

如何让皮肤细胞变身干细胞?

“基因剪刀”CRISPR技术,可以让皮肤细胞变身干细胞!

据美国每日科学网站近日消息,美国格莱斯顿研究所科学家首次借助“基因剪刀”CRISPR技术,激活细胞内的单个基因,将老鼠的皮肤细胞变成了诱导多能干细胞(iPSCs)。新方法不仅有助于科学家更方便地获得重要的细胞,也能进一步了解细胞的重编程过程。

诱导多能干细胞是对成熟细胞重编程得到的,像胚胎干细胞一样具备分化成多种细胞的潜力,可用于修复受损的组织和器官。CRISPR基因编辑技术能精确查找一串代码在基因组中的位置,进行删除或修改。

每个细胞都拥有生物的全套基因组,其具体身份和功能取决于哪些基因处于工作状态。比如,在皮肤细胞里,与皮肤功能相关的基因打开,其他基因关闭。要把它变成干细胞,就要关闭皮肤相关基因,打开与干细胞功能相关的基因。

诱导多功能干细胞

聚乙二醇、电击、离心、病毒这些是常见方法。骨髓造血干细胞也有诱导的,不过说实话成功率是问题,很容易出现差错。

诱导干细胞的方法同样是物理、化学致癌因子的一部分。所以诱导干细胞可能使细胞癌变,在分化的过程中只要有一点差池,就会导致无限制分裂,也就是癌变。

细胞本身的全能型是因为遗传因子是完整的,通过不同的诱导方式会往不同方向分化,变成癌细胞有两种情况,一是诱导出错,二是诱导成功后传代培养时没有及时停止,出现细胞株的无线增值(即不死性)。所以诱导这一技术还有待发展。

什么是诱导多能干细胞

通过采用导入外源基因的方法使体细胞去分化为多能干细胞,对于这类干细胞我们称之为诱导多能干细胞

iPS技术

iPS技术是干细胞研究领域的一项重大突破,它回避了历来已久的伦理争议,解决了干细胞移植医学上的免疫排斥问题,使干细胞向临床应用又迈进了一大步。随着iPS技术的不断发展以及技术水平的不断更新,它在生命科学基础研究和医学领域的优势已日趋明显。

美国哈佛大学研究人员采取添加特殊化合物的方法,将体细胞制造IPS的效率提高了100多倍。目前这项研究在大鼠实验中已获得成功,而在制造人类IPS时也可采取同样方法,以提高效率。该成果被业界称为IPS研究中的一大进步。

IPS是由一些多能遗传基因导入皮肤等细胞中制造而成。在制造过程中,美国研究人员使用了4种遗传基因,同时加入了7种包括可阻碍特定蛋白质合成的物质和酶在内的化合物,以研究其各自的制造效率。研究结果显示,没有添加化合物时,遗传基因的导入效率为0.01%—0.05%,而加入了一种叫“巴尔普罗酸”的蛋白质合成阻碍剂之后,导入效率竟升至9.6%—14%。

诱导多能干细胞是什么?

诱导多能干细胞是对成熟细胞重编程得到的,像胚胎干细胞一样具备分化成多种细胞的潜力,可用于修复受损的组织和器官。CRISPR基因编辑技术能精确查找一串代码在基因组中的位置,进行删除或修改。

每个细胞都拥有生物的全套基因组,其具体身份和功能取决于哪些基因处于工作状态。比如,在皮肤细胞里,与皮肤功能相关的基因打开,其他基因关闭。要把它变成干细胞,就要关闭皮肤相关基因,打开与干细胞功能相关的基因。

2006年,格莱斯顿高级研究员山中伸弥博士用4种被称为转录因子的关键蛋白处理普通的皮肤细胞,制造出了诱导多能干细胞。这些转录因子可改变各基因的工作状态。在上述研究的基础上,格莱斯顿高级研究员丁盛(音译)团队不使用转录因子,而是通过向细胞添加化学品混合物,制造出了诱导多能干细胞。

在最新研究中,丁盛团队又提供了制造诱导多能干细胞的第三种方法——使用CRISPR基因调控技术,直接操纵细胞的基因组。他们选取了两个只在干细胞中表达、且对多能特性至关重要的基因Oct4和Sox2,这两个基因能打开与干细胞功能相关的其他基因,并关闭无关基因。实验表明,用CRISPR激活两个基因中的任意一个,都能触发细胞重编程,使其变身为诱导多能干细胞,而激活操作只需对基因代码进行一处修改。

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