间充质干细胞培养方法步骤（间充质干细胞 培养基）

本文目录一览：

• 1、动物细胞传代顺序
• 2、干细胞打入大鼠的量是自体造血干细胞移植最好的医院多少
• 3、如何才能培养出好的间充质干细胞
• 4、间充质干细胞原代培养首次换液怎么换
• 5、用α-MEM培养基培养间充质干细胞需要添加什么因子，添加的量是多少

动物细胞传代顺序

动物细胞传代培养的操作步骤

1.观察培养基是否正常，细胞状态如何，细胞密度如何，决定是否传代。观察时拧紧盖子。

2.加热PBS、versene、培养基，(提前做好) 瓶子不要倒着放，不要让液体接触到瓶塞。

3.打开超净台(先开风机，后开照明)，用75%乙醇清洁台面，点燃酒精灯。不要把废液缸拿出去倒，如果废液太多，可以用其他容器先装废液。取小离心管一个，置于架子上。

4.取尖吸管、吸量管各一支，放置在专用的架上。放置的方式，注意吸管、吸量管前端都不要与架子接触。

5.取待传代的细胞。打开versene，用酒精灯外焰烧。烧吸管时距离酒精灯心远些，不要把渣滓带进去。把试剂拿入台子的时候，尽量平稳，不要让试剂碰到瓶口。

6.用吸量管吸取旧的培养基，置离心管中，吸量管加入versene，然后将versene瓶收起来。(加versene主要是为了干细胞美容液使用方法将旧培养基洗去)。在离心管中间部分将液体加入。吸液体和加液体时都不要对着细胞。

7.打开胰酶，然后将versene弃掉。换新管，用尖吸管吸取适量胰酶加入。加胰酶后，尽快放平，使细胞消化时间一致。

8.将细胞放入37度孵箱。放孵箱2min, 收胰酶，打开PBS. 之后拿出来镜下随时观察。使用二次消化法，去除容器中残余的细胞。别忘了用旧培养基中和。

9.取细胞，镜下观察消化情况。消化程度合适之后(细胞变圆，但不漂起)，用尖吸管弃去胰酶，取离心管中的培养基加入细胞，吹打，至所有细胞从培养皿底部脱落下来。用PBS洗细胞，versene对细胞有毒性，且不能被血清中和。然后吸取至离心管中，800 rpm离心5分钟。

10.吸量管吸取适量培养基加入新的培养皿中。

11.细胞离心毕，用吸新培养基的管弃去上清，先把泡沫吸走。换吸量管吸取培养皿中培养基适量，加入离心管，小体积混匀，将细胞重悬，尖吸管吹匀。

12.擦计数板，用枪吸10ul的液体，计数。不要把枪伸到离心管内。

13.吸量管吸取细胞悬液，加入新的培养皿中。镜下观察，摇匀，放入37度孵育。收超净台。

干细胞打入大鼠的量是多少

SCSP number:

SCSP-402

细胞名称:

SD大鼠骨髓间充质干细胞

细胞描述:

大鼠骨髓间充质干细胞

大鼠品系:

SD大鼠

细胞来源:

SCSP取4周龄的SD大鼠骨髓，自行分离制备

SCSP 培养液:

MSC完全培养液：SCSP-615

α-MEM medium with GlutaMAX™-I （Gibco 32571） 500 ml

FBS（Biochrom S0115） 56 ml

Pen Strep（Gibco 15140） 5.6 ml

细胞说明:

取自SD大鼠骨髓，通过机械法在无菌环境下分离，使用MSC完全培养液贴壁培养，传代扩增至第二代冻存。集落形成率5%，CD29、CD90表达率70%, CD34、CD45、CD11b表达率5%，具备分化成为脂肪、成骨、软骨的能力。

细胞代数

P2

细胞总数/每支:

106

体积/每支:

500µl

传代方法:

待细胞长满至90%时，用0.05%胰酶消化，按照2x104/cm2传代或按1:2-1:3比例进行传代。

传代周期：3-5天 传代比例：1:2-1:3 换液频率：3天

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃

冻存液：

培养液80%，FBS10%，DMSO 10%

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如何才能培养出好的间充质干细胞

MSCs在密度过高的情况下会老化，细胞体积会增大，CD105降低，所以原代细胞不可等到密度过大的时候传代，融合度达到50~60%时弃除组织块。密切观察细胞等融合度大概能达到70%左右，进行传代，传代密度不可过高或过低，过高或过低都会影响细胞的干性和贴壁能力。 廊坊康宝汇泰就是干这个的，有兴趣可以一起去参观一下。

间充质干细胞原代培养首次换液怎么换

只要吸出一半弃去，

留在培养瓶中一半，

再加入等量新鲜培养基吹吸均匀或摇匀就可以了，（仅供参考）

用α-MEM培养基培养间充质干细胞需要添加什么因子，添加的量是多少

干细胞相关的培养液都必须在5％CO2的气体环境中培养使用。否则会对细胞产生影响。气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。氧气参与三羧酸循环，产生供给细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种成分。开放培养时一般把细胞置于95%空气加5%二氧化碳混合气体环境中。二氧化碳既是细胞代谢产物也是细胞生长繁殖所需成分，它在细胞培养中的主要作用在于维持培养基的pH值。大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4，偏离这一范围对细胞培养将产生有害的影响。一般情况下，细胞耐酸性比耐碱性大一些，在偏酸环境中更利于细胞生长。