西藏小鼠原代干细胞培养（小鼠骨髓细胞原代培养）

本文目录一览：

• 1、请教小鼠原代脂肪干细胞的免疫治疗费用医保能报销多少形态及分离培养条件
• 2、小鼠细胞原代培养,培养基与胎牛血清比例
• 3、小鼠胚胎成纤维细胞的培养
• 4、小鼠心肌细胞的原代培养实验原理
• 5、小鼠原代脾细胞养了得浆细胞性乳腺炎开刀了怀孕容易复发吗很多次都没养起来怎么办

请教小鼠原代脂肪干细胞的形态及分离培养条件

小鼠脂肪来源干细胞的分离、培养及鉴定

脂肪来源干细胞（Adipose-DerivedStemCells,ADSCs)作为组织工程的种子细胞正受到越来越多的关注。 本实验采用一次消化多次收集与差速贴壁法分离小鼠腹股沟及附睾脂肪组织中的ADSC。通过倒置显微镜观察ADSC的一般形态；透射电子显微镜观察ADSC的超微结构；流式细胞术及激光共聚焦显微镜检测ADSC表面标志；利用特定的诱导液诱导ADSC分化及利用扫描电子显微镜观察ADSC与胶原支架的相容性。 结果显示ADSC呈长梭形或成纤维细胞样，旋涡状或束状交叉生长。ADSC细胞体积大，胞质内含有线粒体及粗面内质网等细胞器。ADSC的生长符合干细胞的生长规律，并可在体外稳定传至第9代。ADSC表达CD44及CD29，不表达CD34。成骨诱导剂诱导后，细胞内碱性磷酸酶表达量增加，细胞基质发生钙化。成脂肪诱导剂诱导后，细胞质内可见较多小脂滴。说明ADSC具有分化为成骨细胞及脂肪细胞的潜能。ADSC能够在胶原支架上铺展生长，说明其与胶原支架具有良好的相容性。 本实验建立了分离、培养小鼠ADSC的技术方法，为将来利用小鼠ADSC进行皮肤、肌腱、血管及神经组织修复的动物实验研究提供了前期实验基础和技术支持。

小鼠细胞原代培养,培养基与胎牛血清比例

小鼠细胞原代培养培养基与胎牛血清比例

主要试剂配制

(1) PBS：用购自中山公司的PBS粉剂，每袋加ddH2O定容至1000ml，调pH7.2，高压灭菌消毒。

(2) 完全培养基的配制：按胎牛血清与RPMI 1640培养液体积比1:9， 无菌条件下加入1％体积分数的双抗贮存液(青霉素+链霉素)，使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U／mL和100 U／mL，置于4℃冰箱保存。

（3）0.4%台盼蓝溶液的配制

台盼蓝 4 g

PBS 少许（研磨）

PBS 定容至 100ml，滤纸过滤，室温保存。

小鼠胚胎成纤维细胞的培养

小鼠胚胎成纤维细胞(MEF) 作为原代培养细胞，其刺激增殖的能力强且可靠、易培养、来源丰富，常被用作干细胞培养的饲养层。一方面提供刺激干细胞增殖的各种因子，另一方面保持干细胞的未分化状态。虽然MEF传代次数有限，但可早期冻存一些，不断复苏，保持长期使用。MEF 的缺点是脸上皮肤过敏该怎么护理无法耐受G418 的筛选。替代方法是从持续表达neo抗性的小鼠品系或转基因品系来分离培养MEF 。利用各种转基因鼠培养的MEF 细胞还是各种基因功能研究的良好工具。

（一）材料

12.5~14.5d 的小鼠胚胎(3~6 只小鼠／次），培养皿（ 直径10cm), DMEM+10%新生牛血清， 15cm 或50cm 离心管（圆底）， PBS 配制的0.05％胰蛋白酶/EDTA0.02%消化液，手术刀、镊子、剪子等器械。

（二）操作步骤

1. 一般操作

(1) 在培养皿中，解剖出鼠胚，以Hanks 溶液消洗。

(2) 除掉四肢、大脑及内脏（肝脏） 。

(3) 用无菌Hanks 溶液＋PBS 漂洗3 次。

(4) 置培养皿中，用手术剪切碎。

(5) 将剪碎组织移入50ml 离心管中，加入约10ml 消化液。

(6) 37°C摇育10min （置水浴或孵育箱中）。

(7) 吸5ml 上清液放入另一50ml 离心管中，加等体积含10％新生牛血清的DMEM 培养液中和胰蛋白酶。

(8) 再加入4ml 消化液至原离心管（内含组织），颠倒摇动，10min 后再吸出5ml 上清液到另一离心管中，加入5ml 含10% 新生牛血清的DMEM 培养液。

(9) 重复上一步骤5 次左右，此时离心管中仅剩无法消化的软骨等。

(10) 离心50ml 离心管，加50ml 含10％新生牛血清的DMEM 培养液。

(11) 取适量移到培养皿或培养瓶中培养。

(12) 第二天换液，直到细胞长满（汇合），1 : 10 传代，再生长至合适密度时可进行冻存。

(13) 根据实验需要复苏细胞，由于MEF细胞传代数有限，实验时应尽可能保留相同代数的细胞进行平行实验。

2. 丝裂霉素处理或γ-射线处理 用作饲养层的MEF 细胞还须进行丝裂霉素处理或干射线处理，步骤如下。

（1） 丝裂霉素处理

复苏冻存的MEF 细胞(5×104个/cm2，保证用时满满一层，不留空间。

汇合状态下的MEF 加入新配制的含10％新生牛血清、10μg/ml 丝裂霉紊的DMEM 培养液， 37 °C 、5% CO2培养箱中培养2~3h 。

以PBS 彻底漂洗数次，胰蛋白酶消化，以每分钟1000 转的速率离心5min,收集沉淀，用新培养液悬浮，调整浓度为3×105g 个/ml。

将细胞接种于经明胶预处理的培养皿中。（明胶预处理： 0.1％明胶溶液浸泡2h, 移走多余的明胶，待自然干燥。）

(2)γ-射线处理

汇合状态的MEF 细胞，以30~ 100Gy 的γ－射线处理。

胰蛋白酶消化，收集细胞，离心（每分钟1000 转， 10min )、计数，接种到明胶预处理的培养皿中。Y-射线处理过的细胞也可以5×106个／ml 的浓度冻存起来。复苏后， 1 支冻存管可接种到4~5 块直径6cm 的培养皿中。

小鼠心肌细胞的原代培养实验原理

是建立细胞系的第一步。

原代细胞培养是从供体取得组织细胞在体外进行的首次培养是一项基本技术，是建立细胞系的第一步。

将小鼠的心肌细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，原代培养心肌细胞作为一种主要的研究模型。

小鼠原代脾细胞养了很多次都没养起来怎么办

调整方法。

1、首先小鼠原代细胞复苏贴壁少，生长慢，调整细胞密度保持在70%以上。

2、其次确保生长状态，选用高质量血清或培养基进行补救，也可以补加5%血清。

3、最后这样就可以成功养起来了。