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干细胞知识

诱导干细胞分化的培养液加什么(诱导干细胞分化时需要添加什么)

max2023-03-02干细胞知识61

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胚胎干细胞培养基中所加入的天然成分是什么

应该是动物的血浆、血清等物质。因为目前人类还没能完全清楚胚胎细胞生长所需的全部物质,所以只有加入血清、血浆补充那些人类还未知的胚胎正常发育群组的物质。

在胚胎干细胞的培养基中加入什么才可以使其分化形成精原干细胞

血清。

ES细胞培养时加饲养层不会促进细胞分化,通常使用的饲养层细胞为成纤维细胞,能够分泌一些促进干细胞维持的因子。

干细胞所用的培养基一般是申请了专利的,不同的干细胞培养目的也会导致不同培养基的使用。

诱导干细胞分化为脂肪细胞所用的培养基中有血清吗

诱导干细胞分化为脂肪细胞所用的培养基中有血清

培养基的选择:

细胞培养是实验室里最常见和最基本的实验了,但却不是最简单的。别小看细胞培养,这里可蕴含着大学问。有时候细胞状态不好,转染、药筛这些实验根本就没办法做。影响细胞培养的因素很多,让我关于nanosight外泌体的信息们先从培养基和血清说起。

◆ MEM是由Eagle’s基础培养基(BME)发展而来的,其中增加了组分的范围及浓度。

◆ 改良的BEM(DMEM)培养基是为小鼠成纤维细胞设计的,现在常用于贴壁细胞的培养。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍,维生素浓度是MEM的4倍,采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L,后来为了某些细胞的生长需要,将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L,这就是大家常说的低糖和高糖了。

◆ aMEM含有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸,它可广泛应用于各种细胞类型,包括对营养成分要求苛刻的细胞。

◆ Ham’s F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的,现在也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM等体积混合使用,得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物,这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。

◆ RPMI 1640培养基是专为淋巴细胞培养而设计的,现在已广泛应用于悬浮细胞的培养。

准备几种培养基,然后花大约两周的时间做一个简单的细胞生长实验,来选择其中最适合的。

以前大部分实验室都是用干粉培养基,但配制过程就较为繁琐,要溶解、调pH值,过滤,过程中可能会产生一些浓度误差,而且有些实验室的水质并不理想,所以培养的效果会有差异。

血清的选择:

血清含有生长因子可促进细胞的繁殖,含有附着因子可促进细胞的贴壁,同时还具有抗胰酶活性。血清同时也是矿物质、脂类及激素的来源。最常用的血清有小牛血清、新生牛血清、胎牛血清和马血清等。牛血清是按照采血时间的早晚来分类的。采血时间越早,营养物质越丰富,所含抗体也越少,因而胎牛血清适合要求高的细胞系和克隆化培养。

而血清批次间的差别就是不可避免的,这种差异来源于不同的制备方法和除菌方法、动物的年龄差别及血清的储存条件等,而且与取血动物的来源关系密切。不同的牧场、不同的气候天气及其他环境因素都可能影响血清的质量。因此选好了一种血清就要尽可能长期使用它。在需要更换时,也要尽量保持与原有的一批血清相似。现在很多公司都提供血清预留,你一旦选定了某个批次的血清,最好备足一年的量,这样可以避免很多麻烦。

血清固然是细胞培养中不可或缺的成分,但血清的批间差异大,更换血清时需要做大量的测试以取保替换的血清与原来的相似。而血清的供应也是必须要考虑的因素。

无血清培养基(Serum-Free Media),通常以SFM表示,顾名思义,就是在细胞培养中不需要添加血清,但是在某些应用中可能要添加生长因子或细胞因子。无血清培养基中添加了血清的主要成分:粘附因子、生长因子、必需的营养物质和激素等,能减少上述血清带来的不利因素,使细胞培养的条件更稳定。但它也不是完美的,从有血清培养过渡到无血清培养的条件并不像想象中那么直截了当。处于发育的不同分化阶段的细胞(例如干细胞与定向前体细胞相比)需要不同的配方,对生长因子和细胞因子的选择尤为重要。而且在去除血清的同时,也去除了一些血清蛋白具有的保护、解毒作用,因此对试剂、水的纯度和仪器清洁度的要求更高。另外,它的价格也比普通的培养基贵很多。

这么多种,要选择起来也是个头疼的事情。除了部分培养基是公开配方的,如用于培养内皮细胞的MCDB 131(Sigma),大部分液体培养基都是专利配方的,也就是说其中的成分是保密的。那么你只能是检索文献、让供应商推荐,然后用自己的细胞做几次传代培养来选出最合适的培养基。毕竟实践出真知嘛。

请问诱导干细胞的分化的方法有哪些啊?

自1981年英国的Evans等从小鼠囊胚的内细胞团(Inner

cell

mass,ICM)分离建立胚胎干细胞(Embryonic

stem

cells,ES细胞)以来,ES细胞的研究就一直是各国研究的热点。近两年,ES细胞分化诱导以及调控方面的研究取得了很多重要的进展,已从ES细胞诱导出神经细胞、心肌细胞、血管和内皮细胞等。利用ES细胞的定向分化可望在基因研究、细胞治疗和组织器官替代治疗等的研究中发挥重要作用。

1.常用的体外诱导方法是在体外培养的成体干细胞中加人入诱导因子。诱导因子包括各种能影响细胞分化的物质,如血清、糖分、维生素、以及各种蛋白因子等。

2.日本学者Oh等首先报道,高浓度肝细胞生长因子(HGF)体外诱导大鼠骨髓细胞分化为肝细胞,并表达CK8,

CK18,

ALB等。

3.2002年,Schwartz等将大鼠、小鼠和人的多能成体前体细胞(MAPC)接种到铺有基质明胶或纤维连结素的培养瓶中,用60%DMEM(低糖型)+

2%

FCS培养体系培养,并加入HGF和/或成纤维细胞生长因子-4(FGF-4),在培养的第7天,MAPC分化为表达肝细胞核因子-3BETA,GATA-4

,CK-19和AFP的上皮样细胞,在第14-28天,这些上皮样细胞表达CK-18,

HNF-4和HNF-1

alfa。大约在第21天,CK-18和ALB染色阳性。这些上皮样细胞也具有肝细胞功能特征:分泌尿素和白蛋白,能摄取低密度脂蛋白并贮存糖原。

4.结果表明,用HGF和FGF-4在体外能将MAPC诱导分化成具有形态、表型和功能特征的肝细胞。实验表明,FGF-4单用可诱导肝细胞分化,用HGF处理的细胞分化程度更高。

干细胞三系分化培养液可以加双抗么

不是绝对的。干细胞三系分化培养液加双抗不是绝对的,视实际情况而定。如果实验室条件足够好,操作足够规范,就尽量不要加双抗了。相反,如果实验条件不够,操作也没有绝对把握即可加上双抗。

请教间充质干细胞成脂诱导分化培养基的配制

充质干细胞成脂诱导分化培养基的配制

诱导液?你说的是成骨诱导条件培养基吧。

5天后半量换液,第10天当观察到少量细胞变为梭形、贴壁,即全量换液,改为条件培养基。此后每3-4天换1次条件培养基。倒置显微镜隔日观察,直至细胞不能传代、衰老死亡为止。

下面就是爬片的制作,染色以及结果判定了。

诱导培养基添加必要的成分使组织切块或细胞形成愈伤组织,分化培养基指把促使愈伤组织细胞恢复全能性,可以进行正常的根茎叶的形成

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