慢病毒包装原理图（慢病毒包装原理图片）

本文目录一览：

• 1、293T细胞是啥牌的面膜补水抗衰老保湿效果好怎么包装病毒的
• 2、慢病毒包装的原理
• 3、慢病毒感染技术原理
• 4、慢病毒载体的基本原理

293T细胞是怎么包装病毒的

慢病毒包装简要程序(以六孔板中的1孔为例):

第一天:

1.用无抗生素DMEM+10%FBS铺板293FT细胞，2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度

第二天:

1.转染293FT细胞。

1.

500ul

Opti-MEM稀释2ug

pWPXLd-目的基因+1.5ug

psPAX2+1.5ug

pMD2.G

2.

500ul

Opti-MEM稀释15ul

lipofectamine2000

3.

5min后，将，溶液混合，室温静止30min

4.

从6孔板中吸出1ml培养基，然后滴加入1ml质粒和脂质体混合物。

2.

6-10h后，移除含有DNA-脂质体复合物的培养基，代之以正常培养液DMED+

10%FBS(从此刻开始算时间)。

第三天:

3.转染24h后，荧光显微镜下观察，转染效率应达到70%以上

第四天:

4.

48h收获含病毒的上清，0.45um滤膜过滤，

同时再往6孔板中加入2ml完全培养基

4.

感染细胞:用一份病毒液+2份完全培养基感染目的细胞。

第五天:

5.

72h后再次收获病毒上清。将昨天感染的细胞离心去除上清，然后再次感染目的细胞。

6.

一般感染48h后，就能见到明显的荧光。

说句实话我上海市免疫所沈蕾是复制过来的，希望可以帮你。。。

慢病毒包装的原理

病毒包装的原理，就是有遗传物质有外壳蛋白，在细胞内可以指导二者包成病毒。腺病毒扩增，也只能在293A里扩增，其他的细胞不行.慢病毒载体多是由HIV改造的，野生型的慢病毒载体是可以复制的，但是用于实验室就只能通过改造使其变为复制缺陷型的。简单来说，就是把相应的涉及相应功能的元件进行替换或者删除。慢病毒包装系统简介及应用

一、慢病毒包装简介及其用途

慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了面部外泌体填充能溶解吗临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。 U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～ 50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。在 siRNA 表达载体中，构成 siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 ～ 5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有 1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成 siRNA 。构建载体前通常要通过合成 siRNA 的方法，寻找高效的 siRNA ，然后从中挑选符合载体要求的序列，将其引入 siRNA 表达载体

慢病毒感染技术原理

慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。构建的siRNA/miRNA慢病毒载体，与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的普通siRNA载体相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，Lentivirus-siRNA克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达。在研究RNAi方面，慢病毒技术是最为有效的一种解决方案。

如您在进行慢病毒感染细胞过程中，效率比较低，可以考虑加入Entrvius-LV感染增强剂，EnvirusTM系列产品不含病毒以及蛋白等其他生物来源成分，不参与病毒和细胞的生理过程。由于EnvirusTM对病毒的吸附和独有的浓缩功能，通过物理作用将病毒大量富集在细胞表面，大大增加病毒与细胞的接触，最大限度促进病毒感染细胞，通常情况下，比不用增强剂， 提高感染效率几倍到几十倍不等 。同时，由于EnvirusTM系列采用纳米技术合成，颗粒均匀，细胞毒性极低，有效减少细胞死亡。

慢病毒载体的基本原理

慢病毒载体系统由两部分组成，即包装成分和载体成分。 与包装成分互补，即含有包装、逆转录和整合所需的HIV顺式作用序列，同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。

为降低两种成分同源重组恢复成野生型病毒的可能，需尽量减少二者的同源性，如将包装成分上5′LTR换成巨细胞病毒(CMV)立即早期启动子、3′LTR换成SV40 polyA等。