神经干细胞培养基配方（神经干细胞体外培养）

本文目录一览：

• 1、EM培养基
• 2、求助，有人用无血清培养基养细胞吗
• 3、Neuron：神经干细胞如何产生神经胶质细胞
• 4、培养全能干细胞的培养基是什么，为什么
• 5、实验室小白篇：细胞培养用的液体

EM培养基

在网上查得的：方法一，EM固态发酵料的配制 1. 基础料配方即供制作EM固 氮发酵料的伺料，它主要用于培养繁殖EM有效微生物群，起到培养基的作用。常用的基料配方有：①玉米粉40%、次粉20％、麦麸20％、豆粕粉10%、菜籽饼粉10%。②玉米粉70%、麦麸15%、豆粕15％。配制方法：将上述原料粉碎，按配方的重量比混合均匀即可。 2．原料准备 制作100公斤固氮发酵料应备齐以下原料：EM有效微生物菌液3公斤、营养液1公斤、基础料100公斤、清洁水35--40公斤。 3．EM固态发酵料制作 ①溶解营养液：将1公斤营养液倒人容器中，加入清洁水，冬季加温水15公斤，充分搅拌使营养液充分溶解，水温高于30℃时要将水温调整到30℃左右。②加入EM菌液并激活：将3公斤EM菌液倒人溶解后30℃的营养液中，搅拌均匀后静置3小时激活。激活后的稀释菌液再加水使总量到35--40公斤，再搅拌均匀即可。③制作固态发酵料：将100公斤基础料与EM稀释激活菌液充分混合，边洒液边搅拌基础料，直到全部基础料色泽一致，无结块为止。手握成团，稍振动即散开。此后将拌好的基础料装人发酵容器，边装边压实，装满后密封容器。④制作固态发酵料的注意事项：严格检查EM原液质量。优质的EM原液呈浅棕褐色，pH值为3．5--4．0，有一定的粘稠度，具红糖香味，每毫升含有效活菌1亿个以上。放室内避光阴凉处保存。基础料配方要合理，配方必须考虑到能量与粗蛋白的配比标准，一般能量应在12．6--13．4兆焦／公斤之间，粗蛋白含量应在15％以上。严禁使用低质、变质原料。稀释激活菌液与基础料的比例可根据基料自身含水量的多少进行调整。每50公斤基础料稀释激活菌液用量可在17.5--20.0公斤之间调整。基础料含水量大，稀释菌液用量可少些，反之可多些。基础料装人容器时一定要压实密封，严防鼠咬和漏气。冬季发酵房温度不得低于15℃，平时最高温度不得高于40℃，最适温度为25℃--30℃。

方法二，EM活菌培养方法1.首先在20公斤白色的干净塑料桶中加入约1/3体积的自来水或井水，然后将蔗红糖或红砂糖500克混合桶内溶解；

2. 将本培养基原料倒入桶中溶解、摇匀，然后加入桶中混合；

3.加入4公斤的高浓度EM液露（本公司各活菌站有售），或本所预配的高浓度菌种（每天混合两次）；

4.然后加满自来水或井水（整桶共20公斤）再摇匀，加盖密封，放置阴凉处发酵5-8天后可直接使用；

5.培养成品的EM菌液为橙黄色，或深黄色液体，带有糖味。

方法很多啊！不过不知道你的用途是什么！方法一是狗饲料，方法二是养虾用的！

求助，有人用无血清培养基养细胞吗

无血清培养基是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。无血清培养基的基本配方为基础培养基及添加组分两大部分。 无血清培养基可避免血清批次间的差异影响，提高细胞培养和实验结果的重复性，减少血清对细胞的毒性作用和血清源性污染，减少了自体免疫细胞回输规定血清中蛋白对某些生物测定的干扰，便于对实验结果的分析。基于无血清培养基以上的优势，ScienCell实验室根据不同细胞的生长特性研发了不同种类的无血清培养基。ScienCell无血清培养基列表如下：

1111 SMCM-sf 平滑肌细胞培养基

1511 NPrCM 神经前体细胞培养基

1521 NM 神经细胞培养基

1601 OPCM 少突胶质前体细胞培养基

1611 OsM 球状少突细胞培养基

2101 KM 角质细胞培养基

2111 KM-d 角质细胞培养基（确定）

2311 FM-sf 成纤维细胞培养基

2561 TEpiCM 扁桃体上皮细胞培养基

2611 OKM 口腔角质细胞培养基

2951 CoEpiCM 结肠上皮细胞培养基

3211 BEpiCM 支气管上皮细胞培养基

3231 SAEpiCM 小气管上皮细胞培养基

4121 EpiCM-2 上皮细胞培养基-2

4321 UCM 尿道上皮细胞培养基

4411 PEpiCM 前列腺上皮细胞培养基

5501 HemGM 造血细胞培养基

5801 STEMium 人胚胎干细胞无血清培养基

5811 STEMium-XF 无异种人胚胎干细胞生长培养基

5881 MEF-cm 小鼠胚胎成纤维细胞培养基

5891 bFGF-std MEF-cm 碱性成纤维细胞生长因子刺激的小鼠胚胎成纤维细胞条件培养基

5911 CSM 心肌细胞选择性培养基

5931 PSCNIM 多功能干细胞神经诱导培养基

6511 CEpiCM 角膜上皮细胞培养基

7311 OEpiCM 卵巢上皮细胞培养基

7511 MSCM-sf 间充质干细胞培养基

7611 MEpiCM 乳腺上皮细胞培养基

细胞转入无血清培养基培养要有一个适应过程，一般要逐步降低血清浓度，直至无血清培养。在降低过程中要注意观察细胞形态是否发生变化，是否有部分细胞死亡，存活细胞是否还保持原有的功能和生物学特性等。

ScienCell无血清培养基，是经灭菌的液体培养基，包含必需和非必需氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质。每套包含500毫升基础液，5毫升细胞生长添加物，5毫升双抗，混匀后即为完全培养基。每一款专用培养基均搭配特定类型的细胞生长添加物成分，为细胞的传代和生长提供最佳环境。

Neuron：神经干细胞如何产生神经胶质细胞

人神经干细胞（Cat.1650）分化于人诱导多能干细胞（hiPSC），hiPSC是用HDF中mRNA重组技术分离得到的。使用PSCNIM培养液（Cat.5931）可使单层HDF-hiPSC可有效地转变为神经上皮细胞，PSCNIM是一种无血清的可有效诱导多能干细胞增殖的培养液。GSK3和TGF-β的协同抑制可在LIF存在时，于7天内将HDF-hiPSC细胞向同质神经干细胞（NSC）分化。

该分化的NSC可由巢蛋白和SOX2特异性抗体进行免疫荧光鉴定。细胞数量是高纯度的：90%的细胞表达巢蛋白，80%的细胞表达SOX2活性。在复苏之后，NSC可在HPSC神经诱导培养基中贴壁培养，或在含中枢干细胞培养基的EGF和bFGF中形成中枢小球。传代后，细胞会形成玫瑰花状和神经管状结构，在含EGF和bFGF的中枢干细胞培养基中以高密度接种于Matrigel包被的培养瓶中。在用Matrigel包被的培养基中HiPSC-NSC可单层传代几个月，或接种于超低吸附培养瓶时，可在中枢干细胞培养基中形成悬浮的神经团块。NSC是多能的，可分化为多种神经和神经胶质亚型。特殊图形开端，如SHH、视黄酸和FGF8，在复苏之后可直接引导细胞分化为不同的神经系。

培养全能干细胞的培养基是什么，为什么

培养全能干细胞的培养基是什么

动物细胞培养液：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、血清或血浆.

植物组织培养液的成分：水、无机盐、蔗糖、植物激素（生长素,细胞分裂素）等.

干细胞对培养条件要求较高,常用的胚胎肝细胞培养基有mTeSR 1培养基,主要成分有：DMEM、bFGF,EGF、血清、双抗、LIF、谷氨酰胺、二巯基乙醇、非必需氨基酸等。

干细胞相关的培养液都必须在5％CO2的气体环境中培养使用。否则会对细胞产生影响。气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。氧气参与三羧酸循环，产生供给细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种成分。开放培养时一般把细胞置于95%空气加5%二氧化碳混合气体环境中。二氧化碳既是细胞代谢产物也是细胞生长繁殖所需成分，它在细胞培养中的主要作用在于维持培养基的pH值。大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4，偏离这一范围对细胞培养将产生有害的影响。一般情况下，细胞耐酸性比耐碱性大一些，在偏酸环境中更利于细胞生长。

实验室小白篇：细胞培养用的液体

一、细胞培养所需的培养液

在细胞的研究和利用过程中，最主要的是要为细胞提供最适的生长条件，保持细胞培养开始时的群体状态。这就要求培养条件始终如一，近乎呆板地坚守细节和常规，而且细胞培养，试剂昂贵，费时、费力，不是随随便便就可以进行的。

细胞只有在最适生长条件下，才会保持正常的核型及功能。如果培养条件上打折扣，就意味着会出现带有染色体重排或突变变异株细胞。某些营养成分或生长因子用量不足或细胞高密度培养时间过长，都不是最适生长条件。

二、平衡盐溶液

平衡盐溶液具有维持渗透压、调节酸碱平衡的作用，同时可以供给细胞生存所需的能量和无机离子成分。最常用于洗涤组织或细胞、配制培养用液的基础溶液是Hanks 溶液和磷酸缓冲盐溶液（简称PBS) 。

三、血清

血清中含有丰富的营养成分，包括多种生长因子及许多未知成分。动物细胞的生长都依赖血清。血清的种类很多，包括胎牛血清、小牛血清、马血清、兔血清、人血清等。

选择一批最适于细胞的血清是很重要的，而且如有可能的话，应要求购买来源公司保留足量，以供应实验使用。这样可避免反复试用以选择最适血清所产生的费用。血清的质量可以通过检测细胞的克隆形成率来衡量。取对数生长期的细胞彻底消化后，以低密度（直径6mm 的平皿中加入约103个细胞）接种5~6 个平皿， 其中一个平皿中加入含30％血清的培养液，以测定高浓度血清的细胞毒作用。7~ 10d 后，出现肉眼可见的克隆时，倒掉培养液， 2％亚甲蓝染色2~5min,观察克隆形态、计算克隆形成率。克隆形成率一般为5%~ 10%。

四、抗生素

一般细胞培养时，抗生素不是必需添加成分。但一些特殊情况下培养液内需加入适量的抗生素，如怀疑有污染、原代培养时、新手操作不够熟练。常用的抗生素有青霉素、链霉素、卡那霉素和庆大霉素。青霉素常用剂量为100U/ml ,链霉素常用剂量为100μg/ml。常配制成100 倍或200 倍， 分装为小包装， 于－20℃条件下保存。一次用一个小包装， 避免反复冻融 。

五、特殊的添加因子

特殊的添加因子可以使细胞培养的条件得到优化。原代培养细胞接种密度需适当提高，应尽可能用营养丰富的培养液，如使用胎牛血清。这些都属于一般优化条件。细胞培养条件优化的原则是：根据细胞类型， 模拟体内环境， 添加不同的细胞生长因子及有利于细胞生存、增殖的添加剂。表1 是常用的细胞培养添加成分。

表 1 常用的细胞培养添加成分

一种细胞生长因子常常是多种细胞的丝裂原，如碱性FGF, 不仅是成纤维细胞的丝裂原，还是内皮细胞、角质细胞、黑素瘤细胞的丝裂原。EGF 可促进上皮细胞、成纤维细胞、胶质细胞及平滑肌细胞等多种细胞的增殖。

培养干细胞时，常添加白血病抑制因子( leukemia inhibitory factor, LIF ) ，又称分化抑制因子( DIA )， 是一种分泌型多肽，可抑制小鼠干细胞的自然分化。一般，可用纯化的LIF 直接加到培养液中，或使用用LIF表达载体转染过的饲养层细胞。正常的STO 细胞也可分泌。STO 细胞还分泌其他干细胞美容价格太贵,坑太深了!深度扒皮!一些促干细胞生长的因子。目前，多数实验室仍使用饲养层细胞。重组的LIF 来源方便，与STO 细胞一起使用时，常用浓度为1000U/ml 。与小鼠胚胎成纤维细胞一起使用时，常用浓度为500U/ml 。

体外培养正常细胞需要使用不同生长因子的选择性组合。通常在已有的经典培养液配方基础上，添加不同因子而成。现在已有多种特定细胞培养液，且有商品供应，如血管内皮细胞培养液、神经干细胞培养液、骨髓干细胞培养液、间充质干细胞培养液、小鼠心肌细胞培养液(Claycomo Medium) 等。

六、消化液

细胞生长至一定密度时，需进行传代。消化液可使细胞脱离生长表面，离散成单个细胞。常用的消化液是0.25%、0.125％的胰蛋白酶和0.02％的二乙胺四乙酸二钠(EDTA) 溶液，以无钙镁的PBS 或Hanks溶液配制。它们可单独使用，也可按一定比例混合后使用。大部分细胞的消化可使用终浓度为0.05%胰蛋白／0.02%EDTA混合液。有些上皮细胞贴壁力强，需较高浓度的胰蛋白酶(0.25%）或延长消化时间，甚至需要37°C温育。如果温育较长时间（超过20min)细胞仍不能脱壁，则应采取分步消化的措施，即将已脱壁细胞移出至离心管，加完全培养液中和胰蛋白酶的作用，对未脱壁的细胞再添加新胰蛋白酶再次消化。

七、细胞培养用的其他华大基因细胞储存国家基因库液体

细胞培养时，还会用到其他一些液体，如谷氨酰胺、HEPES 、丙酮酸钠、各种细胞生长因子、各种组织或细胞条件培养液，以及调整pH 使用的5.6%NaHCO3等。

谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，会导致细胞因生长不良而死亡。因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，故要适时添加。可配制200倍液体－20℃ 冰箱中保存，在使用前加入培养液内，终浓度为2mmoVL 。

HEPES 是一种非离子缓冲液，在pH 7.2~7.4 范围内具有较好的缓冲能力，在高浓度时对一些细胞可能有毒。HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠( 0.34g/L)共用，以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。安全浓度范围10~25mmol/L。丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源。一些生长缓慢的细胞加入，可明显改善细胞状态。通常配制200倍液，-20℃ 冰箱保存，在使用前加入培养液内终浓度为1mmol/L。

另外， 2－巯基乙醇(2-Mercaptoethanol, 2-Me) 对细胞生长有很重要的作用。有人认为它相当于胎牛血清， 有直接刺激细胞增殖作用。2-Me 的活性部分是硫氢基，其中一个重要作用是使血清中含硫的化合物还原成谷胱甘肽，能诱导细胞的增殖，为非特异性的激活作用。同时避免过氧化物对培养细胞的损害。另一个重要作用是促进分裂原的反应和DNA 合成，增加植物凝集素(PHA) 对淋巴细胞的转化作用，已广泛应用于杂交瘤技术。也开始用于一些难以培养的细胞。常用终浓度为5×10-5mol/L。常配制成0.1mol/L 的储存液，用时每升培养液加0.5ml 。