细胞储存液氮罐使用流程（细胞液氮保存）

本文目录一览：

• 1、细胞的头皮痒有什么快速止痒的办法冷冻和储存
• 2、液氮罐使用方法
• 3、生物样本库液氮罐的使用方法？
• 4、怎样才是免疫细胞最适温度正确的液氮罐使用方法呢？
• 5、怎样用液氮罐直接冻存细胞

细胞的冷冻和储存

细胞生长时的表型会发生改变或漂变，所以细胞必须计数，计数后应马上冻存。

冷冻细胞前

1 检查冷冻细胞所需试剂和器具是否备齐。

2 确认有无菌的可用于冷冻的冻存管 。

3 确认液氮罐里是否有冻存细胞的位置。

冷冻细胞

1 将培养基中的细胞培养至对数生长期。

2 进行活细胞计数，不要冻存死细胞比例高达20％以上的细胞。

3 决定冻存量，安排需要几个冻存管。

冻存细胞在融化时要稀释10 倍，而稀释后的液体是5X种子液。

例如：如果种子液的密度为5.0 X 105 个／ ml, 那么融化后重新悬浮细胞时细胞的密度为2. 5 X 106 个／ ml, 所以冻存细胞时的细胞密度为2.5 X 107 个／ ml 。

1 准备好冷冻培养基， 分装成1 ml, 冻存培养基通常包括一般培养基、10%~20%血清、5%~10％的甘油或二甲基亚砜。如果你免疫治疗费用医保能报销多少不清楚用什么，那么就使用20％的血清和10％的二甲基亚砜。

2 在冷冻培养基中用移液管小心吹打粒状沉淀。

3 每个冻存管中分装1 ml 冻存培养基，放置在冰上操作。

4 把冻存管放入冻存盒中，做好标记，放入-60C 或更低温度的冰箱，放置16~24 小时。

5 倒些液氮至冰盒内，把细胞从冰箱转移到液氮罐之间要把细胞放在这样的冰盒内。如果没有现成的液氮，可以把细胞放在干冰上。

6 将细胞放置在合适的位置，立即做好记录。

液氮的使用

1 细胞常常保存在液氮罐或是液氮制冷柜中，但是要每隔几个星期补充液氮

2 自动填充液氮的罐子，必须定期检查，以保证管道的畅通以及液氮罐没有空掉。

3 在操作液氮罐内容器时要戴好厚手套，否则会冻伤手臂。

4 从液氮罐内拿出细胞时至少也应戴上乳胶手套

5 不要在液氮罐内悬吊物品，也不要吸入气化后的液氮，用手挥开液氮后，就能看见液面了。

6 戴好保护眼睛的眼罩，以免操作冻存管时，冻存管爆炸溅伤眼睛。

7 决不能把没有拧紧的管子放入液氮中，而且要提前找负责液氮罐管理的人员确定位置，不要乱放。

8 不要关闭警报，定期检查。

9 如果听到了液氮罐的报警声，立即通知实验室管理人员。如果是周末或凌晨，则先检查确认是否是由于液氮面过低或温度过高引起的报警，再联系负责液氮罐的人员。

液氮罐使用方法

液氮罐使用方法:应先将提斗略为提高，使斗底离开底座，再将提斗平行移至罐的中央，顺其自然向上提，动作要从容迅捷，不可使用强力，以免扭弯或折断把柄，取放提斗时还要注意避免碰擦颈管内壁，以免损坏颈管，手柄要放妥分度圈内，盖好盖塞以免多跑氮。

液氮罐贮存液体介质时，请务必要关闭进/排液阀和增压阀，必须打开放空阀。

扩展资料:

液氮罐用来放置所需要冷冻或冷藏的物品、样品、细胞、动物精液等。液氮罐进行充装液氮后，把需要冷冻或冷藏的物品放入提筒中，在把提筒放入液氮罐里进行冷藏冷冻。

一般提筒底部有孔，用户不必担心拿出提筒时会将液氮一起提出。液氮罐是专为生物样品以安瓶方式贮存而设计，特别适于医疗、生物科研领域。贮存制品容量大、占据空间小，液氮消耗低的特点使它们成为同类产品中最为经济的选择。

参考资料来源:百度百科-液氮罐

生物样本库液氮罐的使用方法？

生物样本库液氮罐的使用方法:

1：刚买的新罐液氮不能超过托盘，等到低温罐体冷透后再加液氮至设定的高度，补液完成后静置24小时，等到罐体温度均匀后再放入储存样本。

2：长期使用后内部的潮湿气体逐渐积蓄成冰粒，会附着在内胆上，随着时间的推移，容器底部的吸管及杂物逐渐增多，对贮存的生物样品造成不利，需要定期进行洗涤剂清除杂物，洗涤周期是1-2年，不过也可根据自己的使用情况定期清洗即可。

3：罐体不能放在阳光暴晒的环境， 应该放在阴凉通风处。

4：罐体的阀门需要定期进行检查，操作的过程中戴上手套，防止出现冻伤现象。

怎样才是正确的液氮罐使用方法呢？

将液氮罐内装好液氮，确定液面到所需的位置。然后将需要冻存的样品放在冻存盒内，做好标记，放置于冻存架(多层提篮)上，插好固定插销放入液氮罐中。

低液位报警器可用于液氮低液位报警，液氮液位监控器采用了智能化设计，具有液氮液位声光预警、报警，温度显示，自动补液，数字温度调节、校准等功能。将报警装置的探头固定在其中一个冻存架上，探头的位置一般在有冻存盒的最上面位置，这样，当液面低于探头的位置，报警装置发出报警声，提示添加液氮，这样可以保证足够的液氮，确保细胞或样品的冻存效果

怎样用液氮罐直接冻存细胞

天驰液氮罐 工作人员建议，细胞株的冻存方法可按以下步骤操作：

（1）取培养2～3天生长旺盛的细胞，用细胞培养液将细胞配成2×106～2×107/ml。

（2）在1ml细胞冻存管中加入0.5ml细胞悬液，0.4ml小牛血清和0.1ml二甲基亚砜（或甘油），混匀后密封。置4℃ 1小时，－20℃ 2小时，然后直接放入液氮中或置液氮蒸汽上过夜后浸入液氮中。