骨髓间充质干细胞用什么培养（骨髓间充质干细胞用什么培养方法）

本文目录一览：

• 1、骨髓间充质干细胞可以用DMEM/F12养吗
• 2、大家培养间充质干细胞都用哪家培养基？
• 3、有没有好的人间充质干细胞用的培养基？
• 4、大鼠骨髓间充质干细胞的分离及培养
• 5、谁能系统比较国内外各种干细胞无血清培养基吗？
• 6、5ml的骨髓养间充质干细胞要怎么养

骨髓间充质干细胞可以用DMEM/F12养吗

DMEM-F12是cik细胞免疫治疗方法最好的医院适于各类干细胞培养的基础培养基，按不同目的还需要你人体免疫细胞有多少数量补加局枯其它东西。看到丁香园里的很多人都是那这个养BMSC的，应该没问题。

但也有人说DMEM/F12容易导致细胞分化，所以个人建议最好使用低乱丛糖培哗腊樱养基。

大家培养间充质干细胞都用哪家培养基？

间充质干细胞态简猜培咐迅养基Thermo fisher ,StemCell都有，但价格太贵了外泌体上市的药物，国内的品牌也推荐埃帆型泽思，适合大规模培养。

有没有好的人间充质干细胞用的培养基？

目前市面上有多款无血清培养基，可以根据具体细胞实验来，一般情况thermo，absin的都可以

大鼠骨髓间充质干细胞的分离及培养

骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal Stem Cells, BMSCs)是骨髓内除造血干细胞之外的另一类非常 重要的成体间充质干细胞，是骨髓造血微环境的重要组成部分，具有支持和调控造血的作用，能被诱导分化为成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞等多种细胞类型。

大鼠骨髓间充质干细胞的分离及培养技术

  一、实验前准备 

实验开始前，将眼科剪刀、眼科镊子、培养皿，15ml 离心管、移液管、移液枪、枪头等放入无菌超净工作台，以紫外线照射 30min。

1. 选取 SPF 级，体重 100~150g 左右的SD 大鼠，断颈处死。将大鼠置于体积分数为 75%的乙醇中浸泡 5 min。

2. 工作台紫外消毒后，采用通风机通风 3min。以 75%酒精擦拭操作台和双手。

3. 无菌条件下，准备好大剪刀、止血钳、眼科剪刀、眼科镊子、干净培养皿。将大鼠仰卧在超净台内的干净培养皿上。

 二、全骨髓提取  

1. 眼科镊沿腹股沟处提拉大鼠皮肤，眼科剪刀剪开腹股沟皮肤，暴露腿部肌肉，从关节处将大鼠大腿剪下。除去骨表面附着的软组织，置于另一无菌培养皿中。

2. 假如在平时操作中，剪刀不易将骨表面肌肉组织剔除干净，可采用无菌纱布擦拭，可方便的将肌肉组织剔除干净，提高所分离细胞的纯度。

3. 用无菌PBS 浸泡清洗。眼科剪剪断两端骨骺，显露骨髓腔，放置于 10ml 含体积分数为10%胎牛血清的新鲜DMEM 完全培养液的无菌培养皿中，取出 1mL 注射器，用镊子钳起骨头的一端，并用注射器吸取完全培养液冲洗骨髓腔至另一培养皿中，由一段骨髓腔冲出骨髓， 重复 3 次，再反方向冲出骨髓，重复 3 次。直至骨髓腔冲洗液变清亮后停止。

  三、细胞制备

吹打细胞悬液，以便分散细胞，收集骨髓悬液于 15 mL 离心管中，1000 r/min 室温离心5 min。

 四、接种培养  

1. 离心后去上清，用 6mL 完全培养液重悬，轻轻吹打，制成单细胞悬液，转移至 25 cm

2. 培养瓶中，轻轻摇匀;置于 37 ℃、体积分数为 5%的 CO2饱和湿度培养箱中培养。

3. 24 小时后，镜下观察，可见细胞浓度极大，全为球形的大鼠骨髓中的血红细胞，如堆积的沙粒状，悬浮于培养液中并有少量血红细胞相互聚御衡集发生。换液，去除漂浮的血细胞， 以后每两三天换液 1 次，直到增殖达到融合。4. 约 7 天后，倒置显微镜下观察细胞形态与生长情况，可见贴壁细胞数量明显增加，融合达 80%~90%，可进行细胞传代。

  五、细胞传代

待细胞融合至 80%~90%开始传代，吸去培养液，以预热的 PBS 轻轻冲洗后，吸去 PBS。采用消化液消化 1-2 分钟则竖，骨髓干细胞贴壁特性强，比较难于消化，消化液可采用提高EDTA 浓度的方法，镜下可见细胞皱缩变圆，终止消化。本实验的消化液配方可以很好地消化，并不会损伤细胞。除消化液特殊外，其他方法同本光盘内的细胞传代方法。

本实验以 1：2 进行传代。

  六、细胞观察 　

细胞传代到第 3 代时，生长融合后，细胞形态均一，呈长梭形集落样分布，并可重叠生长，细胞纯度可达 95%以上。此时细胞可用于后续实验，或采用表表面标志物进一步验证其纯度：验证标准为CD34 阴性，CD44 阳性。

从本实验结果中可见：全骨髓培养法可分离培养出纯度高、活力旺盛的骨髓间充质干细胞。

  七、注意事项   

1. 缓慢冲洗骨髓腔：

冲洗骨髓腔时为了避免冲起许多气泡损伤细胞，应缓慢冲洗。

2. 严格无菌：

取骨髓间充质干细胞的整个过程都需要谨慎，保证无菌操作

3. 培养基中血清浓度：

过多的血清中细胞因子可以促进细胞增殖，但细胞老化也快。而且一般来说，选择质量好 10%的胎牛血清有利于 MSCs 的培养

4. 原代细胞静置培养：

原代细胞孙拆大置于培养箱 24～48h 内，应处于静置状态，不宜取出培养瓶观察生长状况，这将使原代分离细胞难以贴壁。

谁能系统比较国内外各种干细胞无血清培养基吗？

1. MesenCultTM 间充质干细胞无血清培养基

非常好用的一款无血清培养基，著名的Stemcell Technology公司的拳头产品。我个人还是比较有感觉的一款培养基，以前经常用来饲养人的骨髓间充质干细胞，扩增迅速，形态也非常好，脂肪干细胞也用它培养过，效果也还是可以。脐带来源的间充质干细胞也饲养过，个人感觉一般，主要是扩增不太好，后来就没有再用了。顺便说一下，买了他家的产品就送一张精美的干细胞相关的大海报和精美宣传册，确实是一家比较用心的公司。

2. AdvcellR间充质干细胞无血清培养基

佰通生物科技 (Biotowntek) 的子牌子，这个牌子在国内主要是给工业客户提供无血清培养基，在实验室可能不如Stemcell Technology和Gibco牌子响亮和普及，但是却是我非常认可的一个牌子，非常有潜力，培养效果超态锋好（呵呵，别喷我，我不是商家，也不是推手，我不给这些公司打广告，好用就好用，不好用就不好用）。我最初用这个牌子的无血清培养基是因为我采用人的眼袋组织分离脂肪干细胞的时候，使用了其他无血清培养基都没有分离出来，最后无奈在市面上买了一款他家的针对脂肪干细胞的无血清培养基马上用上，结果有很多细胞贴壁，FACS显示 CD29，CD44表达高达98%，CD90和CD105表达也在95%左右圆掘。我一下就来了兴趣，把他们家的间充质干细胞培养基也拿来培养我们的细胞，令我感到惊讶的是，骨髓来源的间充质干细胞和脐带来源的MSC都能够很好地扩增，速度非常快，干性维持也非常好，有一次我扩增了十七八代，表型分析和三系分化实验完全没问题，核型分析也完全正常。现在我基本上大多数时候养脂肪干细胞和间充质干细胞都用这个牌子。关键是性价比超高啊，像我这种做治疗研究的人，用的量太大，全买Stemcell Technology伤不起啊。

3. StemProR MSC SFM无血清培养基

大名鼎鼎的Life Technology公司的产品，号称第一种适合培养人的间充质干细胞的无血清培养基，饲养骨髓间充质干细胞效果还是非常不错的。但是我们用来培养脐带来源的间充质干细胞扩增不如AdvcellR和MesenCultTM效果明显。饲养脂肪干细胞的话，不推荐使用，我们用过来饲养抽脂分离的脂肪干细胞，细胞比较容易分化。

4. Sciencell的间充质干细胞无血清培养基

美国的牌子，国内较早就有代理商卖他们的间充质干细胞无血清培养基。以前我们主要用这个牌子来养脐带来源的间充质干细胞，细胞形态也非常好，扩增迅速。骨髓来源的间充质干细胞和脂肪干细胞也用过，效果还行。他们的培养基相比于其他国外的品牌性价比还是非常高的。

5. Oricell无血清培养基

广州赛业生物的培养基，这个牌子推广力度比较大。我们以前用他们的间充质干细胞无血清培养基来饲养小鼠的骨髓间充质干细胞，效果还是比较好的，扩增速度较快。用它培养小鼠的骨髓间充质干细胞传个五六代还是没有什么问题的，再往后的话，感觉分化还是稍微有些严重，不过现在不知道培养基优化得更好没有橘闭核。

5ml的骨髓养间充质干细胞要怎么养

骨髓间充质干细胞使用烂漏普通培养基会使细胞失去干性，也就是失去分饥孙烂化能力，自发分化成某种细胞有这种可能，但很少提及。一般情况下失去分化潜能或失去凯竖自我更新能力我们认为是细胞老化了。