骨髓基质干细胞诱导成骨细胞（骨髓基质干细胞诱导成骨细胞的原因）

本文目录一览：

• 1、骨髓间充质干细胞三系诱导分化技术
• 2、干细胞移植治疗股骨头坏死好处有哪些？谢谢了，大神帮忙啊
• 3、造血干细胞可以生成骨细胞吗
• 4、成骨细胞的动物细胞内的储能物质为什么不是脂肪来源谱系种类别
• 5、请教成骨诱导液中各种成分的作用
• 6、骨髓间充质诱导为成骨细胞过程中细胞长满了可以传代吗

骨髓间充质干细胞三系诱导分化技术

1.1 接种干细胞

取对数生长期的细胞，按照2.0x 10e4cells/cm2的细胞密度接种至培养器皿，于37°C,5%CO2培养环境下培养至汇合度90~100%，弃掉上清，加入成脂诱导分化培养基诱导液。NOTE:如细胞贴壁性较差，建议使用0.1%明胶对培养底面进行包被。

1.2 细胞分化诱导

于37°C, 5%CO2培养环境下培养约3天，更换为成脂诱导分化培养基维持液，培养1天后，再更换为成脂诱导分化培养基诱导液，继续培养3天。按照以上换液频率诱导14~21天,并注意观察细胞形态变化。根据细胞诱导形成的脂滴数量和大小，决定终止细胞诱导的时间，并进行染色鉴定。

2. 染色鉴定

2.1 细胞固定

吸去培养基困带使用适量1xPBS清洗一次,弃去后取适量4%中性甲醛溶液覆盖培养器皿底面,室温固定30~60min,弃去固定液再使用1xPBS清洗两次。

2.2 油红0染色

取生理盐水或1xPBS与油红O原液配制油红0工作液(油红0原液:生理盐水=3:2)，现用现配。配制后可对油红0工作液进行离心，以沉淀染色液中的过饱和析出物。向清洗干净的诱导孔内加入适量油红悉尺清0工作液,静置染色30min。吸走油红0工作液，用1xPBS清洗两次，并加入适量1xPBS避免细胞干燥。

2.3 诱导评估

显微镜下观察成脂染色效果，并进行图像采集和诱导评估。诱导成功时，脂滴与油红0染料结合后呈现红色或橘红色。NOTE:干细胞的成脂分化水平因细胞类型、细胞供体来源，培养条件、细胞代次、细胞状态和分化时间等因素而异。

1. 细胞分化诱导

将对数生长期的细胞消化下来计数，成软骨诱导分化培养基诱导液重悬细胞，离心后调整细胞密度密度1.0~2.0x 10e7cells/mL。吸取20 μl细胞悬液(约2.0~4.0x 10e5个细胞)悬滴至24孔板中央。置于37°C， 5%CO2培养环境下培养2~3 h使细胞贴壁。2~3 h后补充1 mL成软骨诱导分睁前化培养基诱导液正常培养。每隔2~3天换液一次。按照以上换液频率诱导21~28天，并注意观察细胞形态变化。

2. 染色鉴定

2.1 细胞固定

吸去培养基使用适量1xPBS清洗一次,弃去.后取适量4%中性甲醛溶液覆盖培养器皿底面，室温固定30~60min后，弃去固定液再使用1xPBS清洗两次。

2.2 阿利辛蓝染色

向清洗干净的诱导孔内加入适量染色液，避光静置染色30min。吸去阿利辛蓝染色液，用1xPBS清洗两次,并加入适量1xPBS避免细胞干燥。

2.3 诱导评估

显微镜下观察成软骨染色效果，并进行图像采集和诱导评估。诱导成功时，软骨组织中的内酸性粘多糖可被阿利辛蓝染成蓝绿色。

1. 干细胞的准备

将对数生长期的细胞消化下来计数，取3x 10e5个细胞转移到15mL离心管中，250g离心4 min。弃上清,加入0.5 mL成软骨诱导分化培养基预混液，重悬细胞，150g 离心5min。小心弃去.上清，加入0.5 mL成软骨诱导分化培养基诱导.液，重悬细胞，150 g离心5 min。将15 mL离心管的管盖稍稍旋开，放置于37°C，5% CO2培养环境下培养。

2. 细胞分化诱导

24h后观察细胞沉淀形变团聚的情况，如有明显的变化，则小心轻柔地拨动管底，尝试让细胞团脱离管底，全部浸润在诱导液中。

置于37°C, 5% CO2培养环境下培养约21天，通常每2天更换一次新鲜配制的成软骨诱导分化培养基诱导液。注意观察细胞团成球情况及表面光滑度，决定终止细胞诱导的时间，并进行染色鉴定。

3. 染色鉴定

3.1 软骨球固定

将软骨球从离心管中转移至EP管,并使用1xPBS清洗两次，最后置于适量的4%中性甲醛溶液中。

3.2 石蜡包埋切片

软骨球经石蜡包埋后切片。

3.3 阿利辛蓝染色

将石蜡切片脱蜡和脱水，使用阿利辛蓝染色液染色30 min，用自来水冲洗2 min,蒸馏水冲洗1次。

3.4 诱导评估

显微镜下观察成软骨染色效果，并进行图像采集和诱导评估。诱导成功时，软骨组织中的内酸性粘多糖可被阿利辛蓝染成蓝绿色。

NOTE:干细胞的成软骨分化水平因细胞类型、细胞供体来源，培养条件、细胞代次、细胞状态和分化时间等因素而异

1.1 明胶包被培养器皿

干细胞培养较长时间后，可能会出现脱壁卷边或漂浮现象，建议使用0.1%明胶溶液对培养器皿进行包被。准备合适的培养器皿，取适量明胶覆盖底面37°C静置30 min,吸取晾干即可使用。

1.2 接种干细胞

取对数生长期的细胞，按照2.0x 10e4cells/cm2的细胞密度接种至包被后的培养器皿中,于37°C，5%CO2培养环境下培养至汇合度60~70%，弃掉上清，加入成骨诱导分化培养基。

1.3 细胞分化诱导

于37°C, 5%CO2培养环境下培养约14~21天，每2~3天换液一次，并注意观察细胞形态变化。根据细胞钙盐结晶析出和钙质结节形成的情况,决定终止细胞诱导的时间，并进行染色鉴定。

2. 染色鉴定

2.1 细胞固定

吸去培养基使用适量1xPBS清洗一次，弃去后取适量4%中性甲醛溶液覆盖培养器皿底面，室温固定30~ 60 min,弃去固定液再使用1xPBS清洗两次。

2.2 茜素红染色

加入适量茜素红染色液染3~5 min,吸走茜素红染色液，用1xPBS清洗两次，并加入适量1xPBS避免细胞干燥。

2.3 诱导评估

显微镜下观察成骨染色效果，并进行图像采集和诱导评估。诱导成功时，钙质结节与茜素红染料结合后呈现红色或橘红色。

NOTE:干细胞的成骨分化水平因细胞类型、细胞供体来源，培养条件、细胞代次、细胞状态和分化时间等因素而异。

干细胞移植治疗股骨头坏死好处有哪些？谢谢了，大神帮忙啊

干细胞移植治疗股骨头坏死是外泌体标志物的Westernblot检测步骤现在提出的又一新兴干细胞治疗疾病的技术。干细胞移植治疗股骨头坏死较以前的常规治疗方法好处更多。那么，到底干细胞移植治疗股骨头坏死好处有哪些呢？首先骨髓基质干细胞具有干细胞的共同特性，能够自我干细胞美容针有副作用吗增殖并具有多向分化潜能。并具有强大的成骨潜能。骨髓基质干细胞强大的增殖能力大大缩短了治疗股骨头坏死所需的时间。高传代条件下，仍可保持干细胞多向分化潜能，骨髓基质干细胞中约有20%处于静止期(G0期)，即足以维持增殖分化所需的细胞供给。而具有多向分化潜能是骨髓基质干细胞的另外一个特征。在特定的理化条件与细胞因子诱导下，可以分化为中胚层的成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌细胞等，由于骨髓基质干细胞具有成骨潜能，也因此，在股骨头坏死发生后，伴有骨缺损情况出现的同时，由于本身的生物学特征所决定，能大量聚集在缺损的骨组织，定向的分化出治疗疾悉基病所需的组织细胞，从而修复缺损的骨组织。其次，骨髓基质干细胞的分泌作用能促进重建侧支血液循环。导致股骨头坏死的根本原因在于股骨头局部血液循环不畅，或血运受阻，治疗关键在于恢复血运。骨髓基质干细胞的分泌作用能分泌出血管内皮生长因子，这种物质能促进毛细血管的生长，从而重新建立侧支血液循环，让血运受阻的股骨头重新得到血供，从而在改善了血液循环睁陆谨环境的同时也使得肌肉萎缩现象得到改善和好转。干细胞移植治疗股骨头坏死好处不光光是上面所提出的这些，而且，干细胞移植治疗股骨头坏死好处还体现悉碧在治疗过程中，安全、无毒、无副作用，治疗原材料广泛，恢复快，出血少等，这些都为患者的尽快恢复提供了良好保障。 查看原帖

造血干细胞可以生成骨细胞吗

不可以，造血干细胞可以产生红细胞，血小板，和包括单核细胞，巨噬细胞，NK细胞前衫橡塌前等免疫细胞，但是只能慧旁产生存在在血里的，不能产生在骨头里的。

成骨细胞的来源谱系种类别

(1)骨髓克隆形成单位(成纤维细胞集落形成单位，CFU-F)；

(2)骨软骨祖细胞，可分化成骨祖细胞和前软骨细胞谱系，常位于骨髓腔中，有很强敏烂档的自身增殖能力；

(3)前成骨细胞，即骨祖历简细胞，能定向分化成成骨细胞，具有合成和增殖能力[1，2]。成骨细胞由多能的间质干细胞在体内的各种调控因素的调节下发展而来，调控因素主要有BMP-2，BMP-2能诱导基质细胞向成骨细胞分化，具体就是诱导间质干细胞分化形成骨祖细胞进而形成前桥乱成骨细胞。

请教成骨诱导液中各种成分的作用

地塞米松：通过促进Cbfal mRNA和Osterix mRNA的表达而促进骨髓基质细胞向成骨细胞分化。

β-甘油磷酸钠：可促进地塞米松对MSC的的诱导分化首升。

Vc（抗坏血酸）：一种重要的营养素和氧化还原剂,在骨盐代谢及骨形成中具有重要作用。在体外，它能增加钙盐的沉积，促进矿化结节的形成，并通过间充质细胞间接基粗调节破骨细胞的分化.维生素C能直接抑制核因子κB受体搏芹镇活化子配体（RANKL）诱导的破骨细胞形成

骨髓间充质诱导为成骨细胞过程中细胞长满了可以传代吗

骨髓间充质诱导为成骨细胞过程中细胞长满了可以传肢则代

间充历坦棚质干细胞(MSCs)是属于中胚层的一类信仿多能干细胞,主要存在于结缔组织和器官间质中,以骨髓组织中含量最为丰富