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小白鼠骨髓干细胞提取(小白鼠骨髓干细胞提取原理)

max2023-05-15干细胞知识81

本文目录一览:

小鼠骨髓的位置及形态

骨髓存在于长骨的骨髓腔,扁骨和不规则骨的松质骨中,以下是小编搜集整理的一篇小鼠不同部位骨髓组织病理切片探究的论文范文,供大家阅读查看。

骨髓是机体的主要造血器官,由骨髓实质和造血微环境组成,其造血功能的强弱可通过骨髓病理切片反应出来。当骨髓被致病因素抑制时,骨髓实质分化增殖不良,造血微环境的改变均可导致机体造血功能下降.因此,众多实验研究者通常选择制作骨髓组织病理切片并观察其镜下特点,以此作为检测造血系统损伤的指标之一。

第 1 页

在大量实验研究制作小鼠骨髓病理切片时,实验者大多选择将小鼠处死后取其股骨,作为制作切片的主要取材部位,也有研究报道采用取小鼠腰椎骨髓或胸骨骨喊弊髓的方法制作骨髓病理切片。对于选取何处病理组织制作切片最能反映机体的造血功能,尚鲜有报道。本实验通过选取小鼠不同部位骨髓组织制作病理切片,镜下观察其骨髓实灶激质及造血微环境,探寻能够更好反映小鼠骨髓病理变化的部位,为今后动物实验制作骨髓病理切片的取材部位选择提供理论依据。

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在制备小鼠骨髓细胞染色标本过程中有哪几个主要步骤影响制片结果

在制备小鼠骨髓细胞染色体标本过程中以下几个步骤需要注意:

提前3-4小时候注射秋水仙素,时间太长或者太短都会影响染色体中期的数目和形态。

在低渗过程中时间和吹打都很重要,低渗过度染色体膨胀,染色后肥肥的,低渗时间不过染色后染色体颜色很深看不出条带。

滴片,如果是教学的实验,要求玻片是冰的,而且要倾斜,滴的高度一般在25-30CM,滴完要过酒精灯,让固定液蒸发。滴的数量不要太多否则会重叠.如果是医院里的染色体制片有专败做局门的滴片机。

小鼠骨髓细胞染色体标本制作:

原理:

由于小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞,具有高度的分裂能力,本实验采用这一材料,通过前处理,低渗,固定,制片,染色等步骤制得染色体标本,可观察到许多处于分裂中期的染色体,胡正可以进行染色体组型分析;

试剂、试剂盒:秋水仙素、姬姆萨染液、固定液、低渗液、生理盐水;

仪器、耗材:天平、离心机、恒温培养箱、显微镜;

实验步骤

一、材料和方法

1.  材料:小白鼠。

2.  设备:天平,离心机,恒温培养箱,显微镜。

3.  药品:秋水仙素,姬姆萨染液,固定液,低渗液,生理盐水。

二、步骤

秋水仙素处理--取骨髓--低渗处理--固定--离心--再固定--再离心--滴察让片--染色--镜检--封片。

小鼠死了还能取组织吗

能。小鼠死了能取组织。小鼠死亡后骨髓干细胞能保持活性4天,这些骨髓移植后能重新发育为组织。

细胞生物学:小鼠胚胎干细胞培养实验步骤

以下是根据NIH老年病研究所提供的英文的R1胚胎干细胞培养protocol整理而成。根据经验作部分修改。

1、一般培养-保持胚胎干细胞处于未分化状态

培养基

细胞复苏

冻存细胞

明胶包被

细胞传代

2 、体外分化

培养基

包被有多聚鸟氨酸/纤维结合蛋白的培养板(使用或不使用盖玻片)

体外分化方法

注:以下培养针对于小鼠的R1胚胎干细胞系,其它胚胎干细胞的培养可以参考。不过人的胚胎干细胞培养不可以采用下面的protocol,需要用专用的protocol和培养基。

一般培养——维持ES细胞处于未分化状态

ES细胞培养用含有LIF(白血病抑制因子)和Feed细胞的培养基(高糖)来阻止细胞的分化。为细胞提供包被有0.1%明胶的平板作棚哗为粘附细胞的基质。建议每2-3天从达到80%-90%融合的平板按1:8的比率传代细胞一次,细胞传代以后,在将细胞接种在0.1%明胶包被的培岩拆养皿之前,通过预先将细胞接种在没有经过包被的组织培养板2个小时,使分化细胞粘附,从而将分化和未分化细胞分开。将细胞全程置于37℃,5%CO2,100%湿度条件下培养。如果在Feed细胞,那么就需要采用MMC进行处理,抑制Feed细胞增殖,但仍然能保持其分泌LIF因子的活性。下文中暂不提及Feed细胞。Feed细胞可以来源于STO细胞或原代胚胎成纤维细胞。

培养基

ES:

配制一20×不含DMEM,HS,LIF的溶液(该溶液也能用于EB培养基——见下文)。分装在50ml 离心管中,(稀释为2×,每管42ml),贮存在-20℃。通过将21ml该溶液,HS和LIF加入450ml DMEM中制备培养基,0.22 μm滤膜过滤。贮存于4℃,时间不要超过2周。

贮存液

DMEM(高糖)

马血清(HS)

L-谷氨酰胺(200mM)

MEM NEAA(10mM)

HEPES(1M)

β-巯基乙醇(55Mm)

PEST

LIF

复苏细胞

细胞被冻存在10%二甲基亚砜(DMSO)中防止结晶的形成,结晶的形成会损害细胞。然而,二甲基亚砜对细胞有毒性,快链枣行速的进行细胞复苏是很重要的。

步骤:

1.从液氮中取出一管细胞;

2.将冻存管置于37℃水浴中2分钟(或放到管内溶液恰好完全溶解);

3.将细胞转移到一15ml Falcon管中;

4.加入5ml ES培养基(用培养基冲洗冻存管);

5.离心3分钟;

6.弃上清,用2ml ES培养基重悬细胞,至少吹打10次;

7.接种在明胶包被(见下文)的6孔或6cm组织培养皿;

8.孵育。

骨髓干细胞从何提取

骨髓干细胞,生长于骨髓内,主要是造血功能伏裂核。所以,一般是采缺掘取骨髓穿刺来取骨髓血,从骨髓血中分离而来。

如捐献造血干细胞时,使用干细胞动员剂,将干细胞释放到外周血中,这样,骨髓干细胞可以大量增生,从外周源档血中也可以分离出来。

血液干细胞是怎么提取啦?

配型成功后采集造血干细羡樱哪胞的方法及过程:现代造血干细胞移植法采用从外周血中采集造血干细胞。用科学方法将骨髓血中的造血干细胞大量动员到外周血中,从捐献者手臂静脉处采集全血,通过血细胞分离机提取造血干细胞,同时,将其它血液成份回输捐献者体内。由于整个采集过程是一个封闭和符合医疗安全要求的环境中进行,因此是极为安全的。

说明白点,就是颂笑需要从一个手臂抽血,通过血液分离机分离出造血干细胞,剩下的还要通过另外一只手臂回输到你的体内,所以需要你的双臂血液循环都足够顺畅.

血液分离机你见过么?在血站采成分血的时候用到的就是它,有时间可以去兄码看看.

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