优化细胞提取 RNA 前的储存

生物细胞储存的技术和方法 2024年03月19日 16:06 63 im

　　优化细胞提取 RNA 前的储存

　　1. 细胞收集与制备

　　使用无 RNA 酶的材料，如塑料管和移液器。

　　从新鲜组织或细胞中收集细胞，并立即进行储存。

　　根据细胞类型和 RNA 提取协议优化细胞收集方法。

　　2. 储存条件

　　直接冷冻（-80°C 或更低）：将细胞沉淀洗涤， resuspend 在不含 RNA 酶的悬浮液中，并在液氮中冷冻保存。

　　液氮蒸汽相储存（-150°C 至 -196°C）：将细胞悬液分装在低 RNase 的 cryovials 中，并保存在液氮蒸汽相上方。

　　三氯甲烷抽提冷冻：在细胞悬液中加入三氯甲烷，促使其在 -80°C 以下的温度下形成保护性层。

　　3. 储存寿命

　　直接冷冻：长达数月至数年。

　　液氮蒸汽相储存：数年至数十年。

　　三氯甲烷抽提冷冻：可延长储存寿命至数年以上。

　　4. 复苏细胞

　　使用 37°C 的水浴快速解冻细胞。

　　避免过度解冻，因为这会降低 RNA 完整性。

　　立即将细胞转移到预热的培养基中并进行传代。

　　5. RNA 提取

　　根据制造商的说明使用试剂盒提取 RNA。

　　选择与储存条件兼容的提取方法。

　　定量和评估 RNA 质量以确保其完整性和纯度。

　　6. 储存 RNA

　　 -80°C 冷冻：将 RNA 溶解在 RNase 无菌水中，并储存在 -80°C 的非冻融循环环境中。

　　 -20°C 储存：短期储存，不超过几个月。

　　稳定剂：加入 RNase 抑制剂或 Ethidium Bromide 等稳定剂以防止降解。

　　7. RNA 稳定剂

　　 RNAlater：浸泡细胞或组织，防止 RNA 降解。

　　 Trizol：一种三唑试剂，可通过形成 RNA-Trizol 复合物来稳定 RNA。

　　 Protector RNomics：一种试剂，可保护 RNA 免受 RNase、氧化和热降解。

人体细胞壁储存的寿命

发表评论