甲醇储存：保存珍贵细胞的最佳实践

生物细胞储存的概述 2024年05月29日 10:05 115 im

　　甲醇储存：保存珍贵细胞的最佳实践

　　存储细胞对于研究、诊断和治疗至关重要。甲醇储存法是一种广泛使用的细胞储存方法，它可以有效地保存细胞活力和功能。本文将详细阐述甲醇储存细胞的步骤，以帮助确保细胞的长期保存和完整性。

　　1. 细胞制备

　　将细胞从培养基中分离并收集。

　　将细胞悬浮在新鲜的培养基中。

　　确定细胞计数和活力。

　　根据所需的存储条件调整细胞浓度。

　　2. 冷却

　　将细胞悬液置于冰浴中，以逐步冷却细胞。

　　缓慢冷却细胞，以防止冰晶形成和细胞损伤。

　　冷却至 4°C。

　　3. 甲醇逐步加入

　　缓慢地向细胞悬液中加入冷的甲醇，逐步增加甲醇浓度。

　　加入甲醇时不断搅拌，以确保均匀混合。

　　最终甲醇浓度通常为 90%。

　　4. 冷冻

　　将甲醇处理过的细胞悬液转移至冷冻管中。

　　在 -80°C 的液氮罐中冷冻细胞。

　　缓慢冷冻细胞，以最大限度地减少细胞损伤。

　　5. 储存

　　将冷冻管储存液氮罐中，温度保持在 -196°C。

　　储存细胞至少 12 个月。

　　6. 复苏

　　从液氮罐中取出冷冻管。

　　在 37°C 的水浴中快速解冻细胞。

　　将解冻的细胞缓慢稀释至培养基中，以去除残留的甲醇。

　　将细胞接种至新鲜的培养基中，并监测其活力和生长。

　　注意事项

　　使用高品质的甲醇，以避免细胞损伤。

　　使用无菌技术进行所有操作，以防止细胞污染。

　　根据细胞类型和存储条件调整甲醇浓度。

　　复苏细胞时，缓慢稀释至培养基中至关重要，以避免渗透性休克。

　　结论

　　甲醇储存是一种有效的细胞储存方法，可以保持细胞的活力和功能。通过遵循上述步骤，研究人员和临床医生可以确保细胞的长期保存和完整性，从而支持广泛的应用，包括研究、诊断和治疗。

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