细胞固定液中细胞的储存
细胞固定液中细胞的储存
引言
细胞固定液是一种化学溶液，用于保存生物样本中的细胞结构和成分。当细胞暴露于固定液时，固定剂将细胞膜和细胞内结构交联，有效地冻结它们的状态。固定后的样本可以长期储存，以便进行后续分析和实验。本文将详细介绍细胞固定液中细胞的储存方法和最佳实践。
储存条件
1. 温度：理想的储存温度为 4°C。较高的温度会加速细胞降解，而较低的温度会导致冻结，这可能导致细胞损伤。
2. 防腐剂：为了防止微生物生长，应将固定后的细胞储存中含有防腐剂的溶液中，例如甲醛或叠氮化钠。
3. pH 值：固定液的 pH 值应在 7.0 至 8.0 之间。较低的 pH 值会导致酸性降解，而较高的 pH 值会导致碱性降解。
4. 光照：光照会加速细胞褪色和降解。应将固定后的细胞储存保存在黑暗的地方。
储存溶液
1. 缓冲液：磷酸盐盐水缓冲液 (PBS) 是储存固定细胞的常用缓冲液。PBS 保持固定液的 pH 值稳定。
2. 防腐剂：如前所述，应在储存溶液中加入防腐剂以防止微生物生长。
3. 渗透压调节剂：加入渗透压调节剂（例如蔗糖或甘油）可以防止细胞在储存过程中膨胀或收缩。
储存时间
固定后的细胞的储存时间取决于固定液的类型、储存条件和细胞类型。一般来说，使用甲醛等强固定剂固定的细胞可以在 4°C 下储存数月甚至数年。使用乙醛等弱固定剂固定的细胞储存时间较短，通常为几个月。
储存前处理
在储存之前，应对固定后的细胞进行以下处理：
1. 彻底冲洗：用 PBS 或其他合适的缓冲液彻底冲洗固定后的细胞以去除残留的固定剂。
2. 脱水：使用乙醇系列（例如 50%、70%、95% 和 100% 乙醇）脱水细胞。脱水可以防止细胞在储存过程中冻结。
3. 透明化：对于某些应用，可能需要透明化固定后的细胞。透明化剂（例如二甲苯或水杨酸甲酯）可以使细胞更透明，便于显微观察。
复苏细胞
当需要使用固定后的细胞时，可以复苏细胞以去除固定剂并恢复活性。复苏过程通常涉及以下步骤：
1. 重新水化：使用乙醇系列以相反顺序重新水化细胞，从 100% 乙醇逐渐降低到 50% 乙醇。
2. 冲洗：用 PBS 或其他合适的缓冲液冲洗细胞以去除残留的乙醇。
3. 去交联：某些应用可能需要去交联细胞以恢复其生物活性。去交联剂（例如蛋白酶 K）可以断裂固定剂形成的交联。
结论
通过遵循这些最佳实践，可以在细胞固定液中成功储存细胞。适当的储存条件、储存溶液和储存时间至关重要，以确保细胞保存完好，以便进行后续分析和实验。
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